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摘要：炎症性肠病是一种可导致动物出现腹泻、腹痛、排出带血或黏稠粪便等症状的慢性肠道炎症疾病，极易复发，严重危害畜牧业的发展，目前没有可根治的药物。研究表明CCR5拮抗剂在缓解炎症性肠病组织病变、减少炎性细胞浸润、改善临床症状方面有显著效果。该文主要介绍CCR5拮抗剂在炎症性肠病中的作用。
关键词：CCR5;炎症性肠病;核转录因子-κB
中图分类号：R574 文献标识码：B doi： 10.3969/j.issn.2096-3637.2019.21.007
0 引言
炎症性肠病（IBD）分为溃疡性结肠（UC）、克罗恩氏病（CD），会导致动物出现慢性和复发性炎症。研究发现CC趋化因子受体5可调节各种细胞因子的产生，促使多种炎症细胞的趋化与激活，在IBD的发病过程中发挥重要作用，阻断CCR5受体能够明显改善IBD[1]。
1 CCR5与IBD
CCR5可介导GPCR经典信号途径和不依赖GPCR的信号通路。当其与相应配体结合后能够介导GPCR经典信号途径，激活异源三聚体Gap蛋白与亚单位分离，形成ATP-Gα复合物激活磷脂酶C（PLC），使4， 5-二磷酸脂PA肌醇水解并产生二酰甘油（DAG）、第二信使1， 4， 5-三磷酸肌醇（IP3），使其细胞外Ca2+内流，细胞储存Ca2+得到释放，上调了钙调蛋白对Ca2+的敏感性。活化的Gap亚基同时活化级联激活蛋白激酶C（PKC），使下游的转录相关信号通路活化。
此外，当CCR5与CCL5/调节正常T细胞表达和分泌因子（RANTES）配体、CCL4/巨噬细胞炎性蛋白1β（MIP-1β）等配体结合后介导不依赖GPCR的信号通路，使相关a附聚焦酪氨酸激酶（RAFTK）磷酸化，形成Syk、Grb2、RAFTK和SHP1多聚信号复合体，通过细胞骨架蛋白激活MAPK信号通路，如JNK， ERK1/2和P38等。细胞种类不同、配体不同与CCR5结合可引发不同类型的JAK-STAT信号转导方式，介导免疫反应向Th1转移产生IL-1， IL-2，IFN-γ、TNF-α等炎性因子，造成组织炎性损伤，引起IBD持续性病理损害，且表达量与疾病的活动度相关。因此，CCR5抑制剂可以通过抑制炎症初期某些趋化因子的活动来减少有害免疫应答[2]。
2 以CCR5为靶点的各类拮抗剂在IBD中的作用
CCR5的天然配体包括RANTES， MIP-IA及MIP-1B，MCP。 目前，以CCR5为靶点的拮抗剂主要包括以下4大类。
2.1 趋化因子衍生物
RANTES/CCR5在IBD中发挥关键作用，在IBD患者中，RANTES水平升高，而RANTES-/-小鼠具有抵御大肠炎的保护作用。RANTES配体拮抗剂Met-RANTES能够阻断CCR5并减少结肠炎病变部位嗜中性粒细胞、单核巨噬细胞等聚集，改善UC动物模型的肠道慢性炎症反应和损伤。TNBS诱导的大鼠UC膜CCR1和CCR5表达明显上调，Met-RANTES能够显著减少肠黏膜肥大细胞、单核细胞和中性粒细胞的浸润，减轻肠道损伤，改善大鼠肠道炎性损伤和肠内菌群易位。
2.2 非肽类小分子化合物
非肽类拮抗剂是对一些趋化因子的氨基端区域进行修饰或删除某些氨基酸，使之与结合后不能传递活化信号，从而阻断介导的炎性细胞募集和免疫炎症反应。如CCR5的特异性拮抗剂TAK-779非肽类小分子能够缓解TNBS诱导的动物结肠炎，使单核/巨噬细胞浸润程度下降，IL-1B和IL-6等促炎因子分泌减少，下调结肠炎模型小鼠体內CXCR3和CCR2、CCR5表达，使炎症反应链阻断，并减轻炎症程度。TAK-779能够抑制上皮黏膜中单核巨噬细胞募集，下调促炎因子，延缓1BD的发生和发展。
CCR2、CCR5和CXCR4在T细胞、单核细胞表面形成异源三聚体，如CXCR4-SDF-1α，其中任何一单体的拮抗剂均能通过该三聚体影响其非对应拮抗受体的生物学活性，如TAK-779可阻断CXCR4-SDF-1α相互结合，抑制此生物轴的生理功能。
2.3 单克隆抗体
MIP-1α为CCR5特异性配体，能够通过活化TNBS诱导的UC模型小鼠体内的Th1细胞，增加基质金属蛋白酶3、IFN-γ、TNF-α等表达水平，加重小鼠肠道免疫损伤。使用MIP-1α抗体预处理TNBS诱导的UC模型大鼠，可显著缩短急性炎症期（24h），缓解肠道免疫损伤。同样MIP-30α单克隆抗体对TNBS诱导的UC模型大鼠有缓解作用，可显著减轻结肠黏膜炎性细胞浸润和肠道损伤程度。
2.4 肽类化合物
宋杨达[3]等筛选出2条能与CCR5第一、第二胞外环特异性结合的GHWKVWL（简称GH）和HYIDFRW（简称HY）活性模拟短肽。研究证实GH和HY能够抑制TNBS诱导的大鼠UC，使炎症范围显著缩小，中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞浸润程度缓解，NF-KB/TNF一。信号通路活化减弱，炎性损伤减轻，显著降低UC疾病活动指数、组织学评分、大体损伤指数，下降COX2、TNF-α表达量，具有亲和力、安全性高，生产成本低等特点。
3 结束语
IBD在自然界分布极其广泛，严重影响畜牧业的发展。CCR5抑制剂阻断有关趋化因子和趋化因子受体，从而阻止炎症细胞募集到炎症部位，缓解炎症性肠病组织病变，减少炎性细胞浸润，改善临床症状。安全性和有效性方面，CCR5抑制剂具有防治IBD的潜在优势，是炎症性肠病临床治疗领域的一个突破和希望。
参考文献
[1] Matthias F， Mathilde P. Cytokine Networks in thePathophysiology of Inflammatory Bowel Disease[J]. Immunity，2019，50（4）：992-1006.
[2] Liu K， Xiao C， Wang F， et al. Chemokine receptor antagonistblock inflammation and therapy Japanese encephalitis virusinfection in mouse model[J]. Cytokine， 2018，110： 70-77.
[3] 宋杨达，刘思雪，宋铱航，等.CCR5第一和第二胞外环特异性结合短肽对大鼠结肠炎的炎症细胞浸润及NF-κB/TNF-α信号通路的影响[J].新医学，2018， 49 （5）：309-314.
作者简介：潘娜（1991-），女，硕士，齐齐哈尔工程学院，助教，主要从事动物分子病原学研究。
关键词：CCR5;炎症性肠病;核转录因子-κB
中图分类号：R574 文献标识码：B doi： 10.3969/j.issn.2096-3637.2019.21.007
0 引言
炎症性肠病（IBD）分为溃疡性结肠（UC）、克罗恩氏病（CD），会导致动物出现慢性和复发性炎症。研究发现CC趋化因子受体5可调节各种细胞因子的产生，促使多种炎症细胞的趋化与激活，在IBD的发病过程中发挥重要作用，阻断CCR5受体能够明显改善IBD[1]。
1 CCR5与IBD
CCR5可介导GPCR经典信号途径和不依赖GPCR的信号通路。当其与相应配体结合后能够介导GPCR经典信号途径，激活异源三聚体Gap蛋白与亚单位分离，形成ATP-Gα复合物激活磷脂酶C（PLC），使4， 5-二磷酸脂PA肌醇水解并产生二酰甘油（DAG）、第二信使1， 4， 5-三磷酸肌醇（IP3），使其细胞外Ca2+内流，细胞储存Ca2+得到释放，上调了钙调蛋白对Ca2+的敏感性。活化的Gap亚基同时活化级联激活蛋白激酶C（PKC），使下游的转录相关信号通路活化。
此外，当CCR5与CCL5/调节正常T细胞表达和分泌因子（RANTES）配体、CCL4/巨噬细胞炎性蛋白1β（MIP-1β）等配体结合后介导不依赖GPCR的信号通路，使相关a附聚焦酪氨酸激酶（RAFTK）磷酸化，形成Syk、Grb2、RAFTK和SHP1多聚信号复合体，通过细胞骨架蛋白激活MAPK信号通路，如JNK， ERK1/2和P38等。细胞种类不同、配体不同与CCR5结合可引发不同类型的JAK-STAT信号转导方式，介导免疫反应向Th1转移产生IL-1， IL-2，IFN-γ、TNF-α等炎性因子，造成组织炎性损伤，引起IBD持续性病理损害，且表达量与疾病的活动度相关。因此，CCR5抑制剂可以通过抑制炎症初期某些趋化因子的活动来减少有害免疫应答[2]。
2 以CCR5为靶点的各类拮抗剂在IBD中的作用
CCR5的天然配体包括RANTES， MIP-IA及MIP-1B，MCP。 目前，以CCR5为靶点的拮抗剂主要包括以下4大类。
2.1 趋化因子衍生物
RANTES/CCR5在IBD中发挥关键作用，在IBD患者中，RANTES水平升高，而RANTES-/-小鼠具有抵御大肠炎的保护作用。RANTES配体拮抗剂Met-RANTES能够阻断CCR5并减少结肠炎病变部位嗜中性粒细胞、单核巨噬细胞等聚集，改善UC动物模型的肠道慢性炎症反应和损伤。TNBS诱导的大鼠UC膜CCR1和CCR5表达明显上调，Met-RANTES能够显著减少肠黏膜肥大细胞、单核细胞和中性粒细胞的浸润，减轻肠道损伤，改善大鼠肠道炎性损伤和肠内菌群易位。
2.2 非肽类小分子化合物
非肽类拮抗剂是对一些趋化因子的氨基端区域进行修饰或删除某些氨基酸，使之与结合后不能传递活化信号，从而阻断介导的炎性细胞募集和免疫炎症反应。如CCR5的特异性拮抗剂TAK-779非肽类小分子能够缓解TNBS诱导的动物结肠炎，使单核/巨噬细胞浸润程度下降，IL-1B和IL-6等促炎因子分泌减少，下调结肠炎模型小鼠体內CXCR3和CCR2、CCR5表达，使炎症反应链阻断，并减轻炎症程度。TAK-779能够抑制上皮黏膜中单核巨噬细胞募集，下调促炎因子，延缓1BD的发生和发展。
CCR2、CCR5和CXCR4在T细胞、单核细胞表面形成异源三聚体，如CXCR4-SDF-1α，其中任何一单体的拮抗剂均能通过该三聚体影响其非对应拮抗受体的生物学活性，如TAK-779可阻断CXCR4-SDF-1α相互结合，抑制此生物轴的生理功能。
2.3 单克隆抗体
MIP-1α为CCR5特异性配体，能够通过活化TNBS诱导的UC模型小鼠体内的Th1细胞，增加基质金属蛋白酶3、IFN-γ、TNF-α等表达水平，加重小鼠肠道免疫损伤。使用MIP-1α抗体预处理TNBS诱导的UC模型大鼠，可显著缩短急性炎症期（24h），缓解肠道免疫损伤。同样MIP-30α单克隆抗体对TNBS诱导的UC模型大鼠有缓解作用，可显著减轻结肠黏膜炎性细胞浸润和肠道损伤程度。
2.4 肽类化合物
宋杨达[3]等筛选出2条能与CCR5第一、第二胞外环特异性结合的GHWKVWL（简称GH）和HYIDFRW（简称HY）活性模拟短肽。研究证实GH和HY能够抑制TNBS诱导的大鼠UC，使炎症范围显著缩小，中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞浸润程度缓解，NF-KB/TNF一。信号通路活化减弱，炎性损伤减轻，显著降低UC疾病活动指数、组织学评分、大体损伤指数，下降COX2、TNF-α表达量，具有亲和力、安全性高，生产成本低等特点。
3 结束语
IBD在自然界分布极其广泛，严重影响畜牧业的发展。CCR5抑制剂阻断有关趋化因子和趋化因子受体，从而阻止炎症细胞募集到炎症部位，缓解炎症性肠病组织病变，减少炎性细胞浸润，改善临床症状。安全性和有效性方面，CCR5抑制剂具有防治IBD的潜在优势，是炎症性肠病临床治疗领域的一个突破和希望。
参考文献
[1] Matthias F， Mathilde P. Cytokine Networks in thePathophysiology of Inflammatory Bowel Disease[J]. Immunity，2019，50（4）：992-1006.
[2] Liu K， Xiao C， Wang F， et al. Chemokine receptor antagonistblock inflammation and therapy Japanese encephalitis virusinfection in mouse model[J]. Cytokine， 2018，110： 70-77.
[3] 宋杨达，刘思雪，宋铱航，等.CCR5第一和第二胞外环特异性结合短肽对大鼠结肠炎的炎症细胞浸润及NF-κB/TNF-α信号通路的影响[J].新医学，2018， 49 （5）：309-314.
作者简介：潘娜（1991-），女，硕士，齐齐哈尔工程学院，助教，主要从事动物分子病原学研究。