【摘 要】
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目的 通过基因反义封闭技术抑制细胞周期素D1(Cyclin D1)的表达,研究其对肝癌细胞增殖以及成瘤性的影响.方法以肝癌HepG2细胞株为研究对象,通过转染可表达Cyclin D1反义互补脱氧核苷酸(AScDNA) 的质粒后,观察Cyclin D1反义cDNA对肝癌细胞Cyclin D1基因表达、体外增殖活性及裸鼠体内成瘤性的影响.结果噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性显示转染表达反义Cycli
【机 构】
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430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科,430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科,430030,武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科,430030,
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目的 通过基因反义封闭技术抑制细胞周期素D1(Cyclin D1)的表达,研究其对肝癌细胞增殖以及成瘤性的影响.方法以肝癌HepG2细胞株为研究对象,通过转染可表达Cyclin D1反义互补脱氧核苷酸(AScDNA) 的质粒后,观察Cyclin D1反义cDNA对肝癌细胞Cyclin D1基因表达、体外增殖活性及裸鼠体内成瘤性的影响.结果噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性显示转染表达反义Cyclin D1的质粒后,HepG2细胞的增殖受到抑制,抑制作用在48 h左右最强;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测显示Cyclin D1 mRNA基因的表达明显被抑制;间接免疫荧光检测结果显示Cyclin D1蛋白表达显著降低;流式细胞仪检测结果显示G0/G1期的细胞比例增高,G2+M和S期的细胞比例下降,HepG2细胞周期在G1期被阻滞;裸鼠成瘤试验显示肝癌HepG2细胞的成瘤性受到明显抑制.结论 Cyclin D1反义cDNA 可以特异性的抑制肝癌HepG2细胞株Cyclin D1蛋白的表达,从而调控细胞周期,抑制肝癌细胞增殖及体内成瘤性.Cyclin D1反义cDNA对于肝细胞癌的生物治疗具有一定的应用前景。
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