人绒毛膜促性腺激素β亚基cDNA的克隆

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用新鲜的人绒毛膜组织提取总RNA,并通过逆转录反应合成cDNA第一链,利用人工合成的一对寡核苷酸引物,采用PCR技术特异性地扩增人绒毛膜促性腺激素β亚基(hCG—β)cDNA,琼脂糖凝胶电泳结果显示扩增片段大小为500bp,与预计的片段长度相符,将此片段刊用T—A载体克隆至PCRⅡ质粒上并进行全序列分析,结果显示克隆片段包含hCG—βcDNA5’端和3’端的非编码区及完整的编码区。 Total RNA was extracted from fresh human chorionic tissue and cDNA first strand was synthesized by reverse transcription reaction. A pair of synthetic oligonucleotide primers were used to amplify human chorionic gonadotropin β (HCG-β) cDNA. The result of agarose gel electrophoresis showed that the size of the amplified fragment was 500bp, consistent with the predicted fragment length. The fragment was cloned into PCRⅡ plasmid with T-A vector and subjected to full sequence analysis. The cloned fragment is shown to contain the non-coding region and the complete coding region of the 5 ’and 3’ ends of the hCG-β cDNA.
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