观察糖尿病神经性骨关节病(DNOAP)患者软骨的病理表现并探讨其发病机制。
方法选取2017年3月—2018年6月西安市红会医院收治的8例DNOAP患者的胫距关节、距下关节、距舟关节的关节软骨为DNOAP组，其中男3例、女5例，年龄20～66(55.7±3.8)岁；2017年4月—2018年7月西安市红会医院因车祸或严重外伤截肢的8例患者的胫距关节、距下关节、距舟关节的关节软骨为正常对照组，其中男4例，女4例，年龄19～65(57.6±3.7)岁。取DNOAP组和正常对照组软骨样本，使用Masson染色和番红O/固绿染色观察软骨组织病理学特征，并通过电子显微镜观察软骨细胞的超微结构变化。取DNOAP组和正常对照组软骨样本进行软骨细胞培养，采用DCFH-DA探针方法通过Image-Pro Plus软件分析荧光强度检测软骨细胞内活性氧的水平，采用Western blot检测软骨细胞中核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、白细胞介素(IL)-1β、骨保护素(OPG)、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、聚集蛋白聚糖(aggrecan)蛋白的表达水平，采用流式细胞术检测软骨细胞凋亡率。
结果DNOAP组软骨病理检查见透明软骨呈条索状排列，软骨细胞减少，软骨下骨增生，结构紊乱，软骨下骨区域大量破骨细胞形成；透射电子显微镜下见DNOAP软骨细胞的线粒体肿胀，膜结构不完整，排列紊乱，内质网严重肿胀，细胞核变大，染色质出现部分断裂，浓聚在核膜边缘。正常对照组软骨病理检查：正常软骨组织可见软骨细胞位于软骨陷窝内，软骨基质染色均匀，软骨下骨排列整齐；透射电子显微镜下：软骨细胞可见丰富的粗面内质网，细胞核内可见正常浓缩的染色质。DNOAP组软骨细胞的活性氧荧光强度为28.1±2.3，高于正常对照组的11.9±0.7，差异有统计学意义(t＝19.059, P<0.01)。Western blot检测DNOAP组RANKL、TNF-α、IL-1β及IL-6蛋白的相对表达量均高于正常对照组，而OPG、aggrecan蛋白的相对表达量均低于正常对照组，差异均有统计学意义(t＝6.062、9.780、12.479、11.696、8.792、7.726, P值均<0.01)。流式细胞检测结果显示，DNOAP组软骨细胞凋亡率为3.3%±0.2%，高于正常对照组的1.2%±0.1%，差异有统计学意义(t＝26.563, P<0.01)。
结论DNOAP的病理学特征是软骨结构和细胞器破坏严重，炎症反应在发病机制中起到一定的促进作用。