【摘 要】
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目的:利用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统对狂犬病病毒糖蛋白(rabies virus glycoprotein,RVG)基因进行克隆、表达、纯化,并对重组RVG进行免疫学特性鉴定.方法:参照GenB
【机 构】
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南京医科大学病理学系,江苏南京210029;南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室,江苏南京210029;江阴力博医药生物技术有限公司,江苏江阴,214400;南京医科大学病理学系,江苏南京,21002
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目的:利用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统对狂犬病病毒糖蛋白(rabies virus glycoprotein,RVG)基因进行克隆、表达、纯化,并对重组RVG进行免疫学特性鉴定.方法:参照GenBank收录的狂犬病病毒CVS-11株RVG基因序列,设计特异性引物,扩增目的基因.RVG基因经BamH Ⅰ/Kpn Ⅰ双酶切后定向克隆到pFastBac-GP67B载体上,阳性重组转座质粒进一步转化E.Coli DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定后获得重组穿梭载体rBacmid-RVG,将其转染至对数生长期的Sf-9昆虫细胞,进行重组RVG的真核表达.His-TrapHP纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.重组RVG免疫小鼠,检测其免疫原性和血清中和活性.结果:用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统表达并纯化了重组RVG,分子量约58 000.经重组RVG免疫后的小鼠血清具有中和活性.结论:重组RVG具有天然RVG的活性,为进一步研制亚单位疫苗及制备筛选中和抗体奠定了基础.
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