【摘 要】
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为了获得奶牛Cas9特异识别位点载体,同时构建无标记Lac S基因载体,并对Cas9载体进行活性验证,以达到建立Lac S基因阳性细胞系的目的,试验基于奶牛β-casein第2内含子区域序列
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31460599)
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为了获得奶牛Cas9特异识别位点载体,同时构建无标记Lac S基因载体,并对Cas9载体进行活性验证,以达到建立Lac S基因阳性细胞系的目的,试验基于奶牛β-casein第2内含子区域序列设计Cas9靶位点作为潜在Lac S基因插入位点、构建Cas9/gRNA载体,利用T7E1酶进行活性验证,构建包含针对靶位点微同源序列的Lac S基因载体。结果表明:经过PCR和测序比对,发现构建的Cas9/gRNA载体具有活性,而且Lac S基因载体可用于整合。同时构建的包含有微同源序列和Cas9靶位点的Lac S基因克隆载体,可用于后续研究。
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