【摘 要】
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目的 构建抑制突变型p53基因siRNA表达载体.方法 化学合成2段编码短发夹RNA序列的、靶向突变型p53基因的寡核苷酸(各58个碱基),退火,克隆到经BglⅡ、HindⅢ双酶切后的pSUPER-
【机 构】
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宁波市第一医院浙江大学医学院附属邵逸夫医院检验科,杭州,310016;
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目的 构建抑制突变型p53基因siRNA表达载体.方法 化学合成2段编码短发夹RNA序列的、靶向突变型p53基因的寡核苷酸(各58个碱基),退火,克隆到经BglⅡ、HindⅢ双酶切后的pSUPER-EGFP1(pSG)载体的polⅢH1启动子的下游,重组构建RNAi质粒,同时设立非特异对照.构建好的干扰载体瞬时转染胃癌细胞SGC-7901,用RT-PCR检测其对突变型p53基因的抑制效果.结果 重组构建的pSUPER-EGFPl-p53(pSG-p53i)载体经双酶切电泳分析及插入基因序列分析,58个碱基成功插入到预计位点,并且序列完全一致.RT-PCR显示pSG-p53i对突变型p53基因的表达具有较好的瞬时抑制作用.结论 载体的成功构建,有助于深入研究其对突变型p53基因的稳定抑制作用.体内合成siRNA的方法,可将RNAi技术用于细胞培养和哺乳动物研究.
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