【摘 要】
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目的 探讨胰腺癌缺失基因(DPC4/Smad4)对增生期血管瘤内皮细胞(HEC)凋亡的影响。方法 分离培养HEC,在细胞中转染Smad4真核表达载体,qRT-PCR和Western blot法检测转染后的细胞
【基金项目】
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国家自然科学基金(编号:81171986).
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目的 探讨胰腺癌缺失基因(DPC4/Smad4)对增生期血管瘤内皮细胞(HEC)凋亡的影响。方法 分离培养HEC,在细胞中转染Smad4真核表达载体,qRT-PCR和Western blot法检测转染后的细胞中Smad4 mRNA及蛋白表达。MTT法测定Smad4对HEC增殖的影响,流式细胞仪测定Smad4对HEC周期和凋亡的影响,Western blot法检测细胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Cleaved Caspase-3)和细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)蛋白水平,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测Smad4对HEC中活性氧(ROS)水平的影响。结果 Smad4真核表达载体能够促进HEC中Smad4 mRNA和蛋白表达。过表达Smad4后的HEC增殖活性降低,G0/G1期细胞增多,细胞凋亡率也升高,细胞中Cleaved Caspase-3水平升高,细胞中CDK4、Cyclin D1蛋白水平下降,细胞中ROS水平升高,与正常培养的HEC比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Smad4诱导HEC凋亡,抑制HEC增殖,阻滞细胞周期,机制与促进Caspase-3活化并减少CDK4、Cyclin D1蛋白表达,促进细胞合成ROS有关。
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