【摘 要】
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目的:探讨RNA干扰技术沉默STAT3信号传导通路对人食管癌Eca-109细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法:针对人STAT3基因mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA (siRNA)的DNA模板,
【机 构】
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南京医科大学附属南京第一医院肿瘤科,天津医科大学分子生物学实验室,
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目的:探讨RNA干扰技术沉默STAT3信号传导通路对人食管癌Eca-109细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法:针对人STAT3基因mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA (siRNA)的DNA模板,将其连入pRNAT-U6.1/neo质粒中,构建STAT3-siRNA表达载体,稳定转染人食管癌Eca-109细胞,利用RT-PCR、Westernblot技术分别检测转染细胞中STAT3基因mRNA和蛋白的表达,MTT实验、流式细胞技术检测转染细胞的增殖、细胞周期和凋亡变化情况。结果:成功构建STAT3-siRNA表达载体,经测序鉴定正确。RT-PCR和Western blot结果显示,STAT3-siRNA3表达载体明显抑制了人食管癌Eca-109细胞中STAT3基因mRNA和蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。MTT实验显示,稳定转染siRNA后,siRNA3实验组细胞的增殖能力明显下降,细胞生长抑制率为 35.68%,较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞技术显示,siRNA3实验组出现了细胞周期阻滞和细胞调亡,细胞周期阻滞于G_0/G_1期,细胞凋亡率为13.26%,明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01):结论:RNA干扰技术沉默STAT3基因可以有效地抑制STAT3基因的表达,进而抑制人食管癌Eca-109细胞的增殖,引起细胞周期G_0/G_1期阻滞,促进其凋亡。
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