【摘 要】
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目的 构建乙型肝炎病毒X蛋白反式激活蛋白2(XTP12)原核表达载体并诱导其在大肠埃希菌中表达.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,以从HepG2细胞提取的mRNA为模板,扩增X
【机 构】
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中国人民解放军总医院,北京,100853北京地坛医院传染病研究所;中国人民解放军第302医院肝衰竭治疗研究中心;
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目的 构建乙型肝炎病毒X蛋白反式激活蛋白2(XTP12)原核表达载体并诱导其在大肠埃希菌中表达.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,以从HepG2细胞提取的mRNA为模板,扩增XTP12目的基因片段,T-A克隆连接到pGEM-T载体,测序正确后将目的片段插入原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导XTP12融合蛋白的表达, 并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot免疫印迹分析和证实融合蛋白的表达.生物信息学方法对蛋白结构和功能进行预测.结果 利用RT-PCR 扩增获得XTP12基因片段,IPTG诱导BL21宿主菌成功表达了XTP12融合蛋白,经SDS-PAGE和 Western blot分析得到证实.生物信息学预测结果显示此蛋白富含螺旋结构,为非跨膜蛋白,无信号肽.结论 利用大肠埃希菌BL21(DE3)能够成功表达XTP12蛋白,结合生物信息学分析结果,为今后研究XTP12蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了良好的基础.
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