利用光镜-电镜关联方法研究发热伴血小板减少综合征病毒核蛋白的亚细胞定位

来源 :中华实验和临床病毒学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bueryuyu33
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目的

通过miniSOG蛋白标记技术观察发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)核蛋白NP在不同时相下的细胞内定位及特点。

方法

miniSOG是新发现的能够被电子显微镜解析的蛋白标签。通过PCR方法克隆SFTSV核蛋白NP与miniSOG融合基因NPSOG,将其构建至真核表达载体,转染细胞;之后对不同转染时相的细胞进行原位固定、光氧化、制备超薄切片,用电镜观察细胞内NPSOG蛋白的表达及分布特点。

结果

携带NPSOG基因的质粒转染细胞后,核蛋白NP在胞浆及核周表达,并逐渐聚集,连接内质网、高尔基体等细胞器在胞浆中形成体积较大、形状不规则的包涵体样结构,未见其他亚细胞结构改变。

结论

SFTSV核蛋白NP单独表达即可形成包涵体,无需其他病毒蛋白协助;包涵体的形成需要一定数量蛋白的定向移动并聚集,这期间可能涉及蛋白与宿主细胞器的相互作用。

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