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[摘 要] 目的 建立反相高效液相法测定心舒片中葛根素含量的方法。方法 采用十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相为乙腈∶水（10∶90）；检测波长为250 nm。结果 葛根素在0.079～1.185 μg范围内呈良好的线性关系；平均回收率为96.21%，RSD=1.10%。结论 该方法不仅操作简单、准确，且重复性好，可用于心舒片的质量控制。
[关键词]心舒片；葛根素；含量测定
Content determination of puerarin in Xinshu pian
[Abstract] Objective？ To study a RP-HPLC methods that determined the puerarin content in Xinshu pian.Methods？ Puerarin was separated completely on an C18column，using a mixture of acetonitrile and water （10∶90） was mobile phase，with UV detection at 250 nm.Results？ Puerarin has better linear correlation between 0.079 μg and 1.185 μg，the results also have shown the recovery rate was 96.21%，RSD 1.10%.Conclusion？ The methods is very stable and accurate，and has good reappearance.It can be used for quality control of Xinshu pian.
[Key words] RP-HPLC；puerarin；Xinshu pian；content determination
中圖分类号：TH365 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）10-0398-01
心舒片是本院的院内制剂，由葛根、毛冬青、红花、益母草等9味中药组成，具有活血化瘀的功效，用于心脉瘀阻所致的胸痹心痛、冠心病、心绞痛、冠状动脉供血不全，临床应用多年，疗效确切。为了更好地保证临床疗效，本文建立反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定心舒片中葛根素的含量，控制心舒片的质量。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
日本岛津LC-10A高效液相色谱仪，SPD-10AV紫外检测器；CT-100恒温箱。上海必能信CQ-250型超声波清洗器。BP211D AG 电子 天平（德国Sartorius）。
1.2 试剂
乙腈为色谱醇，水为重蒸水。葛根素（ 中国 药品生物制品检定所，批号：110752-200209）；心舒片（本院制剂室生产）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
（1）色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱Kromasil C18（250×4.6 mm，5 μm）（天津市琛航科技仪器有限公司）。（2）流动相：乙腈∶水（10∶90）。（3）检测波长：250 nm。（4）流速：1.0 ml/min。（5）柱温：40 ℃。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷干燥12 h的葛根素对照品，加50%的乙醇制成每1 ml含0.05 mg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取心舒片10片，除去糖衣，精密称定，研细，取细粉约0.1 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入50%的乙醇25 ml，称定重量，超声处理（功率250 W，频率50kHz）30 min，放冷，再称定重量，以50%的乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
2.4 阴性对照溶液的制备
按处方比例称取除葛根的其他药材适量，依照心舒片的制备工艺和供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
2.5 线性关系的考察
分别精密吸取葛根素对照品溶液（浓度为0.079 mg/ml）1 μl、2 μl、6 μl、10 μl、15 μl，注入液相色谱仪，测定，以葛根素的进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为Y=1E+07X+196030（r=0.9999）。结果表明葛根素在0.079～1.185 μg范围内具有良好的线性关系。本文由教育大论文下载中心WwW.JiaoYuDa.CoM整理
2.6 精密度试验
精密吸取葛根素对照品溶液10 μl（0.039mg/ml），重复进样6次，峰面积积分值分别为4682219、4622176、4671835、4712194、4666457、4622364，RSD=0.76%，表明本法精密度良好。
2.7 重复性试验
取同一批心舒片（批号：060321），除去糖衣，研细，取细粉5份，每份约0.1 g，精密称定，按2.3项下的方法制备样品，进行含量测定。结果分别为5.503 mg/片、5.511 mg/片、5.547 mg/片、5.378 mg/片、5.322 mg/片，平均为5.452 mg/片，RSD为1.78%。表明本方法具有较好的重复性。
2.8 稳定性试验
取重复性试验项下试验号5的供试品溶液，每2 h进样1次，每次10？ μl，连续进样6次，结果表明在10 h内峰面积积分值基本稳定，RSD为0.48%。
2.9 回收率试验
贮备溶液：精密称取葛根素对照品7.9 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1 ml中含葛根素0.79 mg的溶液。
取已知含量（5.452 mg/片）的心舒片小试样品（批号：060321），除去糖衣，研细，取细粉约0.05 g（6份），精密称定，1号、2号分别精密加入贮备溶液0.61 ml，3号、4号分别精密加入贮备溶液1.0 ml，5号、6号分别精密加入贮备溶液1.4 ml，水浴蒸干，按供试品溶液制备方法进行制备并测定含量， 计算 回收率，结果平均回收率为96.21%，RSD为1.10%。见表1。表1？ 回收率试验结果（略）
2.10 样品测定
按拟定的含量测定方法测定三批心舒片中葛根素的含量，结果见表2。表2？ 含量测定结果 （略）
3 讨论
通过对提取溶媒、提取时间进行了考察（见图1～3），结果以加入50%的乙醇、超声处理30 min为佳。干扰试验结果表明，葛根的阴性对照样品无干扰。该方法不仅操作简单、准确，且重复性好，可用于心舒片的质量控制。根据测定的结果，并考虑到药材的产地、采收、加工等因素，暂定每片心舒片含葛根以葛根素（C21H20O9）计不得少于3.0 mg。
参考文献
[1] 邢协望，心舒片中葛根素的含量测定，论文网，2011，05
[关键词]心舒片；葛根素；含量测定
Content determination of puerarin in Xinshu pian
[Abstract] Objective？ To study a RP-HPLC methods that determined the puerarin content in Xinshu pian.Methods？ Puerarin was separated completely on an C18column，using a mixture of acetonitrile and water （10∶90） was mobile phase，with UV detection at 250 nm.Results？ Puerarin has better linear correlation between 0.079 μg and 1.185 μg，the results also have shown the recovery rate was 96.21%，RSD 1.10%.Conclusion？ The methods is very stable and accurate，and has good reappearance.It can be used for quality control of Xinshu pian.
[Key words] RP-HPLC；puerarin；Xinshu pian；content determination
中圖分类号：TH365 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）10-0398-01
心舒片是本院的院内制剂，由葛根、毛冬青、红花、益母草等9味中药组成，具有活血化瘀的功效，用于心脉瘀阻所致的胸痹心痛、冠心病、心绞痛、冠状动脉供血不全，临床应用多年，疗效确切。为了更好地保证临床疗效，本文建立反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定心舒片中葛根素的含量，控制心舒片的质量。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
日本岛津LC-10A高效液相色谱仪，SPD-10AV紫外检测器；CT-100恒温箱。上海必能信CQ-250型超声波清洗器。BP211D AG 电子 天平（德国Sartorius）。
1.2 试剂
乙腈为色谱醇，水为重蒸水。葛根素（ 中国 药品生物制品检定所，批号：110752-200209）；心舒片（本院制剂室生产）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
（1）色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱Kromasil C18（250×4.6 mm，5 μm）（天津市琛航科技仪器有限公司）。（2）流动相：乙腈∶水（10∶90）。（3）检测波长：250 nm。（4）流速：1.0 ml/min。（5）柱温：40 ℃。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷干燥12 h的葛根素对照品，加50%的乙醇制成每1 ml含0.05 mg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取心舒片10片，除去糖衣，精密称定，研细，取细粉约0.1 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入50%的乙醇25 ml，称定重量，超声处理（功率250 W，频率50kHz）30 min，放冷，再称定重量，以50%的乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
2.4 阴性对照溶液的制备
按处方比例称取除葛根的其他药材适量，依照心舒片的制备工艺和供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
2.5 线性关系的考察
分别精密吸取葛根素对照品溶液（浓度为0.079 mg/ml）1 μl、2 μl、6 μl、10 μl、15 μl，注入液相色谱仪，测定，以葛根素的进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为Y=1E+07X+196030（r=0.9999）。结果表明葛根素在0.079～1.185 μg范围内具有良好的线性关系。本文由教育大论文下载中心WwW.JiaoYuDa.CoM整理
2.6 精密度试验
精密吸取葛根素对照品溶液10 μl（0.039mg/ml），重复进样6次，峰面积积分值分别为4682219、4622176、4671835、4712194、4666457、4622364，RSD=0.76%，表明本法精密度良好。
2.7 重复性试验
取同一批心舒片（批号：060321），除去糖衣，研细，取细粉5份，每份约0.1 g，精密称定，按2.3项下的方法制备样品，进行含量测定。结果分别为5.503 mg/片、5.511 mg/片、5.547 mg/片、5.378 mg/片、5.322 mg/片，平均为5.452 mg/片，RSD为1.78%。表明本方法具有较好的重复性。
2.8 稳定性试验
取重复性试验项下试验号5的供试品溶液，每2 h进样1次，每次10？ μl，连续进样6次，结果表明在10 h内峰面积积分值基本稳定，RSD为0.48%。
2.9 回收率试验
贮备溶液：精密称取葛根素对照品7.9 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1 ml中含葛根素0.79 mg的溶液。
取已知含量（5.452 mg/片）的心舒片小试样品（批号：060321），除去糖衣，研细，取细粉约0.05 g（6份），精密称定，1号、2号分别精密加入贮备溶液0.61 ml，3号、4号分别精密加入贮备溶液1.0 ml，5号、6号分别精密加入贮备溶液1.4 ml，水浴蒸干，按供试品溶液制备方法进行制备并测定含量， 计算 回收率，结果平均回收率为96.21%，RSD为1.10%。见表1。表1？ 回收率试验结果（略）
2.10 样品测定
按拟定的含量测定方法测定三批心舒片中葛根素的含量，结果见表2。表2？ 含量测定结果 （略）
3 讨论
通过对提取溶媒、提取时间进行了考察（见图1～3），结果以加入50%的乙醇、超声处理30 min为佳。干扰试验结果表明，葛根的阴性对照样品无干扰。该方法不仅操作简单、准确，且重复性好，可用于心舒片的质量控制。根据测定的结果，并考虑到药材的产地、采收、加工等因素，暂定每片心舒片含葛根以葛根素（C21H20O9）计不得少于3.0 mg。
参考文献
[1] 邢协望，心舒片中葛根素的含量测定，论文网，2011，05