【摘 要】
：
目的 NS0宿主细胞残留DNA检测(定量PCR-Taqman探针法)方法的验证.方法 针对小鼠骨髓瘤细胞(NS0)基因组重复序列设计合成多对引物、探针,通过实验优选最佳的引物探针组合;应用
【机 构】
：
中国食品药品检定研究院,卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室,北京100050;中国科学院上海生命科学研究院湖州营养与健康创新中心,浙江湖州,313000
论文部分内容阅读
目的 NS0宿主细胞残留DNA检测(定量PCR-Taqman探针法)方法的验证.方法 针对小鼠骨髓瘤细胞(NS0)基因组重复序列设计合成多对引物、探针,通过实验优选最佳的引物探针组合;应用所建立的前处理试剂盒(磁珠法)对供试品中宿主细胞残留DNA进行富集纯化;根据《国际人用药品注册技术协调会(ICH)》及《中国药典》通则9101的要求,应用所建立的NS0宿主细胞DNA残留检测试剂盒进行线性与范围、准确度、精密度、专属性、定量限的方法学验证.应用NS0细胞生产的单克隆抗体工艺中间品及原液,验证所建立试剂盒对实际生产样品的检测性能,并组织5个独立实验室进行协作标定.结果 NS0细胞DNA检测(Taqman法)正向引物序列:CCCCTTCAGCTCCTTGGGTA、反向引物序列:GCCTGGCAAATACAGAAGTGG、荧光探针序列:FAM-AGGGCCCCCAATGGAGGAGCT-TAMRA;NS0细胞DNA标准曲线在3fg· μL-1～300 pg·μL-1内,线性良好(r2＞0.99);对6个浓度梯度检测的准确度偏差均＜15％;定量限为3fg·μL-1;内部参考品DNA标定结果为30 μg·mL-1;精密度良好(RSD≤30％);能特异性地检测NS0细胞DNA,对大肠杆菌DNA、人类基因组DNA(人肾上皮293T细胞)、CHO(中国仓鼠卵巢)细胞DNA无扩增反应.另外,对于生产工艺中间品及原液的检测回收率均在70％～ 130％,RSD均＜15％.5个独立实验室间协标检测数据RSD均＜30％.结论 自主研发NS0宿主细胞DNA残留检测试剂盒(定量PCR-Taqman探针法)特异性强、灵敏度高、准确度好,能够满足NS0宿主DNA残留检测要求.
其他文献
本文采用沪深300股指期货上市以来的5分钟高频数据,运用Granger因果检验法、方差分解法和脉冲响应函数分析法进行实证分析,发现我国股指期货市场与股票市场之间互为格兰杰原
秦文君当代著名儿童文学作家,中国作家协会全国委员会委员,上海市作家协会副主席。她的小说风靡校园,先后获得国际安徒生奖提名奖、中宣部“五个一工程”奖、国家图书奖、中
这一次,我们要讲的是阿信的故事。为了防止混淆,特意声明,此阿信非信乐团前主唱苏见信,而是五月天的主唱陈信宏。好了,大家肃静,鞠小萍姐姐开始给你们大家讲述阿信的故事了…
有别于传统的采用谐振法测量电容器,本内容重点介绍数字式测量电容器的方法,此方法全部采用数字集成电路,构成Cx-T转换电路、石英晶体振荡器、1/4、1/10、1/100分频器、逻辑
鉴于拍频技术是将待测的高频信号转换到低或中频段,极大提高测量分辨率的特性,本文设计了基于拍频技术的频标比对平台,比较采用时间隔计数器测量拍频信号和拍频信号数字化后
１９９６～ １９９８年，对兰州市医院消毒工作状况进行了调查。对物体表面与人员手用浸有采样液的无菌棉拭涂抹采样，检测合格（细菌总数≤１０ ｃｆｕ／ ｃｍ２，且未检出致病菌）率，物体表面 ３年分别为的．５％（７／ １１６）、 ８４．３％（３２３／３８３）与 ４７．１
From 1996
本文对大功率甚低频发射天线的电流测量方法进行了研究,介绍了电流测量中遇到了技术难点,提出了采用新技术新设备和改进原有测量方法两种解决方方案,解决了电流测量的难题.收
在生活中常常可以见到这样的现象,同年龄的人,从外表上看可相差10岁以上,也就是说有些人有未老先衰现象。这种未老先衰是由多种原因造成的,其中早衰物质对人的影响是重要原
In industrial CT,it is often required to inspect large objects using short line-detectors. To acquire the complete CT data for the scan-ning slice of large obje
电阻抗断层成像(EIT)技术充分利用人体阻抗所携带的丰富的生理和病理信息实现功能成像.EIT图像重建是一个严重病态的非线性的逆问题,属于EIT技术的关键和难点.在简介EIT系统