【摘 要】
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通过PCR技术,从苦瓜总DNA中扩增出编码MAP30成熟蛋白的基因,经测序鉴定后亚克隆到原核表达载体pET-30a中,构建成带有N端6His-tag的融合表达载体.表达载体用CaCl2介导的化学转
【机 构】
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中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海南国栋药物研究所有限公司
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通过PCR技术,从苦瓜总DNA中扩增出编码MAP30成熟蛋白的基因,经测序鉴定后亚克隆到原核表达载体pET-30a中,构建成带有N端6His-tag的融合表达载体.表达载体用CaCl2介导的化学转化法转化E.coli BL21(DE3),然后利用PCR筛选阳性克隆.工程菌经1mmol/L IPTG诱导4h实现高效表达,而且在30℃时融合蛋白表达量最高,约占菌体总蛋白56%.可溶性分析表明,该融合蛋白在大肠杆菌中主要以可溶的形式存在.重组蛋白通过Ni2+鏊合亲和层析进行纯化,纯化蛋白占上清总蛋白37.2%,
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