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目的
分离、培养并鉴定人圆锥角膜相关成纤维细胞(HKCs)。
方法采用组织块贴壁法培养HKCs和正常人角膜成纤维细胞(HCFs)，倒置相差显微镜和电子显微镜下分别观察细胞形态和超显微结构，细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增生，Western blot法检测成纤维细胞标志性蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及α1-1型胶原蛋白(COL1A1)和α1-3型胶原蛋白(COL3A1)蛋白的表达水平。
结果与HCFs相比，HKCs生长速度较快，胶原纤维变细减少，线粒体肿大，嵴消失，高尔基体明显扩张，内质网严重肿胀。培养后不同时间点2种角膜成纤维细胞A值比较，差异均有统计学意义(F组间＝5 023.13，P<0.01；F时间＝38 518.16，P<0.01)，其中同一时间点HKCs细胞A值均明显大于HCFs细胞A值，差异均有统计学意义(均P<0.01)。HKCs和HFCs中α-SMA的相对表达量分别为120.00±5.77和100.00±0.00，COL3A1的相对表达量分别为158.33±4.41和100.00±0.00，COL1A1相对表达量为88.33±1.67和100.00±0.00，HKCs中α-SMA和COL3A1的相对表达量均较HCFs明显升高，HKCs中COL1A1的相对表达量较HCFs明显降低，差异均有统计学意义(t＝－3.46，P<0.05；t＝－13.23，P<0.01；t＝7.00，P<0.05)。
结论成功培养并鉴定HKCs，该细胞适用于建立体外圆锥角膜细胞模型。