烟草叶绿体转化载体的构建及转基因植株的获得

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选择烟草叶绿体基因组同源片段rp12-trnH-psbA和trnK-ORF509A,及aadA抗壮观霉素基因,构建烟草叶绿体转化载体pTRZ。制备pTRZ DNA金粉子弹,通过基因枪轰击烟草幼苗叶片,经壮观霉素筛选获得了愈伤组织和转化再生植株。对烟草叶绿体转化植株进行PCR和Southern分析,结果证明其中No.13、16、23为整入了外源aadA的叶绿体转基因植株,同时其子代呈现壮观霉素抗性,aadA基因得到稳定遗传。 Tobacco chloroplast genome homologous fragment rp12-trnH-psbA and trnK-ORF509A, and aadA anti-spectinomycin gene were selected to construct tobacco chloroplast transformation vector pTRZ. Preparation of pTRZ DNA powder projectile bombardment of tobacco seedling leaves by particle bombardment, obtained by screening spectinomycin callus and transformation of regenerated plants. PCR and Southern analysis of tobacco chloroplast transformed plants showed that No.13,16,23 were transplanted into the aadA transgenic chloroplast transgenic plants, while their progenies showed spectinomycin resistance, aadA gene was stable inheritance.
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