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目的:观察IL-2+IL-15组合体外培养方案对于NK、NKT和T细胞亚群的比例、表型、杀伤肿瘤细胞活性与黏附活性的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采集天津医科大学附属肿瘤医院生物治疗科2012年5月至2012年7月期间收治的5例乳腺癌患者的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),用IL-2+IL-15联合培养方案进行培养,观察培养15 d后细胞的扩增倍数和淋巴细胞亚群比例变化,流式细胞术检测细胞免疫表型、细胞表面受体的表达,LDH释放法和CD107a释放法检测不同细胞亚群对于HLA匹配或不匹配的靶肿瘤细胞系的杀伤活性,活细胞工作站检测总扩增产物对于不同靶肿瘤细胞系的黏附作用。结果:与扩增前相比,IL-2+IL-15培养方案扩增15 d后,NK细胞[(36.74±17.10)%vs(16.34±3.12)%,P<0.05]、NKT细胞[(24.88±12.34)%vs(4.06±2.05)%,P<0.05]比例显著增加,CD4+T细胞和Treg细胞比例显著降低(P<0.05),CD8+T细胞比例显著升高(P<0.05);NK细胞表面活化受体NKp30[(92.38±7.19)%vs(32.14±17.64)%,P<0.05]、NKp44[(74.26±16.28)%vs(1.94±1.60)%,P<0.05]、NKG2D[(98.58±1.28)%vs(66.50±24.84)%,P<0.05]的表达率均显著升高,CD16表达率显著降低[(85.12±7.66)%vs(95.60±2.53)%,P<0.05];NKT细胞、T细胞表面活化受体DNAM-1和NKG2D明显升高(P<0.05)。总扩增产物、NK细胞和NKT细胞对HLA不匹配的靶肿瘤细胞的杀伤率均显著高于HLA匹配靶细胞系的杀伤(P<0.05);在共孵育至84 min时,与HLA匹配的靶肿瘤细胞系相比,总扩增产物细胞与HLA不匹配的靶细胞系黏附结合数目显著增多[(4.80±0.53)vs(2.25±0.35)个,P<0.05]。结论:IL-2+IL-15组合方案在扩增NK细胞的同时,也能够有效扩增NKT细胞,即可以扩增CD56+细胞群。并且,扩增产物主要以不受HLA限制的NK细胞杀伤活性为主来杀伤肿瘤细胞。