【摘 要】
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目的:本研究针对CydinDl mRNA设计脱氧核酶,观察其切割CyclinDl mRNA的有效性,探索脱氧核酶在乳腺癌基因治疗的可能性.方法:体外转录CyelinDl mRNA底物,设计并合成DZ(脱氧核
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目的:本研究针对CydinDl mRNA设计脱氧核酶,观察其切割CyclinDl mRNA的有效性,探索脱氧核酶在乳腺癌基因治疗的可能性.方法:体外转录CyelinDl mRNA底物,设计并合成DZ(脱氧核酶)、DZs(硫代修饰脱氧核酶,序列同DZ,但两侧各有两个脱氧核苷酸进行了硫代修饰)、ASO(反义寡聚脱氧核苷酸)、无关DZ对照.体外切割CyelinD1 mRNA,经转染试剂将脱氧核酶转染入乳腺癌细胞,利用RT-PCR法检测CyclinD1 mRNA水平的变化,免疫细胞化学及图像分析系统检测CyelinDl蛋白质表达情况,MTT法初步估计乳腺癌细胞的生长效应.结果:DZ与DZs在体外均可切割CyelinDl mRNA底物,其切割率分别为63.2%与60.9%;经转染DZ、DZs的细胞均下降CyclinD1 mRNA的水平,而且DZs的作用更强;经转染DZ与DZs的细胞均下降CyclinD1的表达,ASO也略下降CyelinD1的表达;DZ、DZs有抑制细胞生长的作用.结论:本实验设计的脱氧核酶能在细胞外有效切割CyelinDl mRNA.在细胞内也能切割CyclinD1 mRNA、抑制CyclinDl的表达、抑制乳腺癌细胞的生长,为乳腺癌的基因治疗提供可能性.
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