【摘 要】
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为探究抗凋亡miR-210是否参与骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)来源外泌体对脊髓损伤(spinal cord injury,SC1)的保护作用,采用全骨髓贴壁法培养BMSC,并通过ExoQuick外泌体提取试剂盒提取并标记BMSC-外泌体,于透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)下观察BMSC-外泌体形态.将大鼠随机分为5组:假手术组(Sham)、SCI模型组、SCI+BMSC-外泌体组、
【机 构】
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四川省医学科学院,四川省人民医院 骨科,成都 610072;四川省医学科学院,四川省人民医院 外科,成都610072
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为探究抗凋亡miR-210是否参与骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)来源外泌体对脊髓损伤(spinal cord injury,SC1)的保护作用,采用全骨髓贴壁法培养BMSC,并通过ExoQuick外泌体提取试剂盒提取并标记BMSC-外泌体,于透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)下观察BMSC-外泌体形态.将大鼠随机分为5组:假手术组(Sham)、SCI模型组、SCI+BMSC-外泌体组、SCI+外泌体-miR-210抑制剂组及SCI+外泌体-miR-210抑制剂-NC组.于大鼠SCI造模后1 h尾静脉注射BMSC-外泌体或PBS干预.于损伤后不同时间点评估各组SCI大鼠的行为学评分(Basso-Beattie-Bresnahan,BBB);尼氏(Nissl)染色观察大鼠脊髓神经元的功能状况;RT-qPCR检测BMSCmiR-210表达;Western blotting检测损伤脊髓组织Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3和caspase-3蛋白的表达水平;TUNEL染色评估脊髓神经元凋亡情况.结果显示,BMSC-外泌体在TEM下呈现类圆形、圆形或茶托状囊泡,直径约40～120nm;从SCI后第7天(Day7,D7,后类推)开始,BMSC-外泌体治疗组的BBB评分显著高于SCI模型组(D7、D14、D21和D28,均P＜0.05);与BMSC-外泌体组相比,外泌体-miR-210抑制剂组BBB评分显著降低(D7、D14、D21和D28,均P＜0.05);与SCI模型组相比,BMSC-外泌体组大鼠TUNEL染色阳性细胞数显著减少(P＜0.01),这一抑制作用可被miR-210抑制剂处理逆转(P＜0.01);与BMSC-外泌体组相比,外泌体-miR-210抑制剂组脊髓组织细胞Bax/Bcl-2比值和cleaved caspase-3/caspase-3比值显著增加(均P＜0.05).由此,大鼠SCI造模后尾静脉注射BMSC-外泌体可明显减少神经元凋亡并改善大鼠运动功能,其作用机制可能与抗凋亡miR-210的功能发挥有关.
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