菌落PCR快速分析抗体库重组率时的假阳性现象

来源 :解放军医学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：ntyiran

【摘要】

：

目的评价菌落PCR法鉴定噬菌体抗体库阳性重组率的可靠性. 方法鼠抗体基因Lc片段、Fd片段经酶切、纯化后,依次克隆入pComb3载体上相应的酶切位点,电转化XL1-blue菌后建立鼠源

【作者】

：

张思河包国强邢金良陈志南

【机构】

：

710032

【出处】

：

解放军医学杂志

【发表日期】

：

2004年3期

【关键词】

：

菌落PCR 质粒PCR 限制性酶切重组率噬菌体抗体库 colony PCR plasmid PCR restriction enzyme digesti

【基金项目】

：

国家高技术研究发展计划(863计划)

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目的评价菌落PCR法鉴定噬菌体抗体库阳性重组率的可靠性. 方法鼠抗体基因Lc片段、Fd片段经酶切、纯化后,依次克隆入pComb3载体上相应的酶切位点,电转化XL1-blue菌后建立鼠源性Fab噬菌体抗体库.比较菌落PCR法、质粒PCR法及质粒酶切法鉴定转化菌阳性重组率的一致性.同时用空菌、空载体、空载体菌等作模板为对照PCR,以排除相关组分的干扰. 结果建立的Lc库的库容为1.175×106CFU, Fab库的库容为1.02×106CFU.3种方法鉴定的阳性重组率不同(Lc的重组率依次

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