论文部分内容阅读
【摘要】目的:比較ELISA法、乳胶法和中和试验的检测性能,探讨提高检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)准确性的方法。方法:三种方法同时检测倍比稀释的阳性对照,比较灵敏度;乳胶法检测3871例经ELISA法初检筛选的标本,阴性标本用ELISA法双孔复查,可疑标本用中和试验确认;配对卡方检验比较三种方法的结果一致性。结果:灵敏度中和试验最高,乳胶法最低;乳胶法较ELISA法特异性更高。ELISA法和乳胶法结果与确证结果的一致性都较好。结论:ELISA法、乳胶法和中和试验联合检测可有效提高检测HBsAg的准确性。
【关键词】乙型肝炎表面抗原;ELISA法;乳胶法;中和试验
【中图分类号】R-1 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801(2015)06-0245-02
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是乙型肝炎诊断、治疗与评估的重要血清学标志物。酶联免疫吸附试验(ELISA)两步法是目前检测HBsAg最常用的方法,但因实验影响因素较多,检测时常常会出现假阳性、假阴性现象[1]。采用乳胶法复查和原法双孔复查可以发现和降低这些情况的发生,提高检验结果的准确性。有些标本在检测时会出现弱反应性,中和试验可以通过计算HBsAg的抑制率,明确样本内是否真正含有HBsAg。
本文回顾了2014年本院的乙肝表面抗原ELISA法的检测情况,比较ELISA法、乳胶法和中和试验的检测性能,探讨提高检测HBsAg准确性的方案。
1.材料与方法
1.1标本来源
选取本院2014年门诊、体检及住院患者检测乙肝三系定性者,挑出HBsAg ELISA法初检阳性标本,HBcAb阳性、HBeAg阳性+HBcAb阳性或HBeAb阳性+HBcAb阳性的阴性标本以及S/CO值0.5-1.0之间的阴性标本共3871例。
1.2仪器与试剂
仪器:Xantus全自动加样器;汇松PW-960洗板机;安图酶标仪。
试剂:上海科华生物技术有限公司乙肝表面抗原ELISA检测试剂盒;艾博生物医药(杭州)有限公司乳胶法试剂;珠海丽珠试剂股份有限公司中和试验试剂。
1.3 实验方法
1.3.1 ELISA法、乳胶法和中和试验同时检测倍比稀释的阳性对照,比较三种方法的灵敏度。
1.3.2先用乳胶法检测以上3871例标本,阴性的标本用ELISA法双孔复查。双孔复查S/CO值0.5-3.0之间的标本用中和试验复查。所有操作都严格按照试剂说明书操作、判定结果,试剂均在有效期内使用。
1.4 统计学方法
采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析,对ELISA法和乳胶法的检测结果与确证结果分别进行配对卡方检验,计算 Kappa指数,Kappa> 0.75 表明两者一致性较好,0.4 2.结果
2.1 三种方法同时检测倍比稀释的阳性对照标本,最低检出浓度ELISA法为1:1024,乳胶法为1:64,中和试验为1:4096。
2.2 ELISA法初检、复检、乳胶法结果和确证结果比较见表1。
3.讨论
ELISA法灵敏度、特异性较高,价格低廉,是目前检测HBsAg最常用的方法。提高检测HBsAg的准确性主要在于减少误诊和漏诊,用快捷有效的方法筛选出假阳性和假阴性的标本加以纠正。
假阳性的常见原因是操作原因,如吸样时携带污染、振荡混匀溅出、洗板不干净、孵育显色时间过长等。实验可知乳胶法的特异性最好,不过最低检出浓度高,灵敏度低,因此对于ELISA法初检阳性的标本先用乳胶法复查可以有效确认较强阳性的标本。单明华等 [2]发现,由另一操作人员用原试剂原方法进行双孔复查可以有效排除初检中因操作原因造成的结果异常。表1中ELISA法初检假阳性有236例,双孔复查假阳性只有8例。
样本中低浓度的HBsAg易因孵育、显色时间不足等造成假阴性。陈慧英等[4]建议HBsAg的复检范围可以选择A值在0.070-0.300之间(即S/CO值约在0.7-3.0之间)。中和试验灵敏度高,可以用中和试验复查,只是成本较高,操作繁琐。钩状效应也会造成假阴性。ELISA两步法的设计是为了避免钩状效应,但冯新国等[3]还是发现有钩状效应的存在,通过乳胶法或者对样本血清进行稀释、增加酶标记物用量或增加洗板步骤可以得到改善和避免。样本稀释等复查方法步骤繁琐,乳胶法进行复查来排除钩状效应具有操作简便,结果快捷,价格也较便宜的优点。本实验未发现钩状效应。
本程序用ELISA法筛查后先用乳胶法复查,乳胶法阴性的标本再用ELISA法双孔复查,可以有效排除钩状效应和确认较强阳性标本,避免稀释复查,减少双孔复查的标本数,提高检测效率。对双孔复查中S/CO值在0.5-3.0之间的标本再进行中和试验确认既可以降低漏检的概率,提高检测的准确性,又可以减少中和试验确认的标本数,降低成本,兼顾临床和经济效益。但本方法不能检测因变异造成的假阴性等情况,还需临床根据病情检测乙肝DNA等。
参考文献:
[1]郝丽. 乙肝表面抗原弱阳性标本复检策略分析. 现代免疫学,2013,05:412.
[2]单明华. 分析147份输血前检查HBsAg呈弱阳性反应样本的复检结果. 临床血液学杂志(输血与检验),2014,04:658.
[3]冯新国,李新红,欧阳淑兰. ELISA二步法检测HBsAg的钩状现象及解决方案. 社区医学杂志,2013,06:82.
[4]陈慧英,肖艳群,张健,等. 酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面抗原临界样本复检范围的探讨. 检验医学,2010,06:447.
【关键词】乙型肝炎表面抗原;ELISA法;乳胶法;中和试验
【中图分类号】R-1 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801(2015)06-0245-02
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)是乙型肝炎诊断、治疗与评估的重要血清学标志物。酶联免疫吸附试验(ELISA)两步法是目前检测HBsAg最常用的方法,但因实验影响因素较多,检测时常常会出现假阳性、假阴性现象[1]。采用乳胶法复查和原法双孔复查可以发现和降低这些情况的发生,提高检验结果的准确性。有些标本在检测时会出现弱反应性,中和试验可以通过计算HBsAg的抑制率,明确样本内是否真正含有HBsAg。
本文回顾了2014年本院的乙肝表面抗原ELISA法的检测情况,比较ELISA法、乳胶法和中和试验的检测性能,探讨提高检测HBsAg准确性的方案。
1.材料与方法
1.1标本来源
选取本院2014年门诊、体检及住院患者检测乙肝三系定性者,挑出HBsAg ELISA法初检阳性标本,HBcAb阳性、HBeAg阳性+HBcAb阳性或HBeAb阳性+HBcAb阳性的阴性标本以及S/CO值0.5-1.0之间的阴性标本共3871例。
1.2仪器与试剂
仪器:Xantus全自动加样器;汇松PW-960洗板机;安图酶标仪。
试剂:上海科华生物技术有限公司乙肝表面抗原ELISA检测试剂盒;艾博生物医药(杭州)有限公司乳胶法试剂;珠海丽珠试剂股份有限公司中和试验试剂。
1.3 实验方法
1.3.1 ELISA法、乳胶法和中和试验同时检测倍比稀释的阳性对照,比较三种方法的灵敏度。
1.3.2先用乳胶法检测以上3871例标本,阴性的标本用ELISA法双孔复查。双孔复查S/CO值0.5-3.0之间的标本用中和试验复查。所有操作都严格按照试剂说明书操作、判定结果,试剂均在有效期内使用。
1.4 统计学方法
采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析,对ELISA法和乳胶法的检测结果与确证结果分别进行配对卡方检验,计算 Kappa指数,Kappa> 0.75 表明两者一致性较好,0.4
2.1 三种方法同时检测倍比稀释的阳性对照标本,最低检出浓度ELISA法为1:1024,乳胶法为1:64,中和试验为1:4096。
2.2 ELISA法初检、复检、乳胶法结果和确证结果比较见表1。
3.讨论
ELISA法灵敏度、特异性较高,价格低廉,是目前检测HBsAg最常用的方法。提高检测HBsAg的准确性主要在于减少误诊和漏诊,用快捷有效的方法筛选出假阳性和假阴性的标本加以纠正。
假阳性的常见原因是操作原因,如吸样时携带污染、振荡混匀溅出、洗板不干净、孵育显色时间过长等。实验可知乳胶法的特异性最好,不过最低检出浓度高,灵敏度低,因此对于ELISA法初检阳性的标本先用乳胶法复查可以有效确认较强阳性的标本。单明华等 [2]发现,由另一操作人员用原试剂原方法进行双孔复查可以有效排除初检中因操作原因造成的结果异常。表1中ELISA法初检假阳性有236例,双孔复查假阳性只有8例。
样本中低浓度的HBsAg易因孵育、显色时间不足等造成假阴性。陈慧英等[4]建议HBsAg的复检范围可以选择A值在0.070-0.300之间(即S/CO值约在0.7-3.0之间)。中和试验灵敏度高,可以用中和试验复查,只是成本较高,操作繁琐。钩状效应也会造成假阴性。ELISA两步法的设计是为了避免钩状效应,但冯新国等[3]还是发现有钩状效应的存在,通过乳胶法或者对样本血清进行稀释、增加酶标记物用量或增加洗板步骤可以得到改善和避免。样本稀释等复查方法步骤繁琐,乳胶法进行复查来排除钩状效应具有操作简便,结果快捷,价格也较便宜的优点。本实验未发现钩状效应。
本程序用ELISA法筛查后先用乳胶法复查,乳胶法阴性的标本再用ELISA法双孔复查,可以有效排除钩状效应和确认较强阳性标本,避免稀释复查,减少双孔复查的标本数,提高检测效率。对双孔复查中S/CO值在0.5-3.0之间的标本再进行中和试验确认既可以降低漏检的概率,提高检测的准确性,又可以减少中和试验确认的标本数,降低成本,兼顾临床和经济效益。但本方法不能检测因变异造成的假阴性等情况,还需临床根据病情检测乙肝DNA等。
参考文献:
[1]郝丽. 乙肝表面抗原弱阳性标本复检策略分析. 现代免疫学,2013,05:412.
[2]单明华. 分析147份输血前检查HBsAg呈弱阳性反应样本的复检结果. 临床血液学杂志(输血与检验),2014,04:658.
[3]冯新国,李新红,欧阳淑兰. ELISA二步法检测HBsAg的钩状现象及解决方案. 社区医学杂志,2013,06:82.
[4]陈慧英,肖艳群,张健,等. 酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面抗原临界样本复检范围的探讨. 检验医学,2010,06:447.