【摘 要】
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目的从人正常肺组织中提取羧肽酶A基因并进行定点突变。方法从人正常肺组织中提取RNA，并进行逆转录得到人羧肽酶A(hCPA)。以计算机模拟hCPA的结构，寻找合适的突变位点。用PCR重
【机 构】
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第四军医大学唐都医院中心实验室 ,第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室
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目的从人正常肺组织中提取羧肽酶A基因并进行定点突变。方法从人正常肺组织中提取RNA，并进行逆转录得到人羧肽酶A(hCPA)。以计算机模拟hCPA的结构，寻找合适的突变位点。用PCR重叠延伸法，对羧肽酶A进行定点突变,并在大肠杆菌中表达。结果序列分析表明，所获hCPA的核苷酸序列为1251bp，编码417个氨基酸。hCPA突变体(mhCPA)基因的1126位核苷酸由G变为A，其余核苷酸序列均未发生变化，相应的此突变体蛋白质的376位核苷酸残基由丙氨酸突变为苏氨酸。将mhCPA基因在E.coli中诱导表达3h后,表达量高达30％左右。结论成功地构建并表达了mhCPA基因，为hCPA在肿瘤的“抗体导向酶前药疗法”(ADEPT)中的应用奠定了基础
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