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[目的]研究蓝莓茎段组培快繁技术。 [方法]以北高丛蓝莓品种‘杜克’为试材，春季一年生新梢茎段为材料进行组培快繁。[结果]进瓶最佳灭菌时间为8～10 min，成活率达75%～88%；最佳增殖培养基为改良WPM+ZT 1.0 mg/L，增殖系数为12.8，生长健壮，平均株高4.8 cm；最佳生根培养基为1/2WPM+IBA1.0 mg/L，生根率达100%，平均根长2.1 cm；最佳移栽基质是草炭土+蛭石，成活率达92.6%。[结论]该研究对蓝莓快速繁育和推广种植具有一定的意义。
关键词蓝莓；组织培养；茎段
中图分类号S663.2文献标识码A文章编号0517-6611（2015）10-027-02
Abstract[Objective] The aim was to study rapid propagation of the stem segment of blueberry. [Method]Using stem segment of newshoots as material in autuam，the tissue culture of Northernhighbush Blueberry ‘Bluecrop’ was studied.[Result]Results indicated that the best sterilization time was 8-10 min，the survival rate reached 75%-88%.The best proliferation medium was improved WPM+ZT1.0 mg/L，the proliferation rate reached 12.8，and the average height was 4.8 cm.The best rooting medium was 1/2WPM+IBA1.0 mg/L，the rooting rate reached 100%，the average length was 2.1 cm.The best transplanting medium was peatsoil mixed with vermiculite，the survival rate reached 92.6%.[Conclusion] The study had certain significance for fast breeding and planting of the blueberry.
Key words Blueberry；Tissue culture；Stem segment
蓝莓（Blueberry），又名越橘，属于杜鹃花科乌饭属多年生落叶或常绿果树，呈灌木状生长[1]，果实深蓝色，皮薄，风味酸甜可口，具有防止人体细胞衰老、增强心脏功能、明目及抗癌等独特的保健功效[2-3]，被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一[4]。蓝莓的常规繁育速度较慢，繁殖规模受插条数量的限制，在短期内不能满足生产需要，而且常规手段繁育的苗木在生长势、果实品质等方面与组培苗相比有很多不足之处[5-6]。笔者对蓝莓的组培快繁进行研究，对蓝莓快速繁育和推广种植具有一定的意义[7]。
1 材料与方法
1.1材料及处理
以大连大学引进的美国北高丛蓝莓品种‘杜克’为试材，于4月份取当年生无病虫害生长健壮的枝条，叶片摘除后，将枝条放入加水的容器中，0～4 ℃下冷藏2～3 d，每天换水。接种前，用洗洁精将枝条洗刷干净，剪成3～4 cm的茎段，流水冲洗20 min。
1.2外植体灭菌
在超净工作台上将剪好的茎段用75%乙醇浸泡30 s，无菌水冲洗1次，然后用0.1%的升汞溶液浸泡8～10 min（根据枝条老嫩程度），用无菌水冲洗4～6次，剪去两端与药液接触部分，最后接种于诱导培养基上进行培养。
1.3增殖培养
外植体在诱导培养基上生长20 d后，将带有两三片叶子的茎段剪下接种到增殖培养基中。
1.4生根培养
外植体在增殖培养基上生长20～30 d，达到一定数量后，剪取高2 cm以上的植株接种到生根培养基中，生根培养基采用液体培养基，不加琼脂，加入滤纸球固定植株。
1.5培养基和培养条件
蓝莓诱导及增殖的基本培养基均采用改良WPM基本培养基，生根培养的基本培养基采用1/2WPM，pH 5.2左右，培养条件为温度（25±2） ℃，光照强度1 500～2 000 lx，光照时间14 h/d。
1.6试管苗移栽
在生根培养基中生长30 d左右，试管苗长出数条1 cm以上的新根时，开始炼苗，在自然光下不揭瓶盖炼苗7 d左右，揭开瓶盖，炼苗3 d，每天用小型喷雾器喷水3次以上，保证叶面不失水，3 d以后用清水洗净苗根部附着的培养基，移栽入营养钵内，放入小拱棚，保证温度在25 ℃左右，湿度90%以上。
2 结果与分析
2.1不同灭菌时间对蓝莓诱导分化的影响
由表1可知，春季进瓶时灭菌时间在8～10 min比较合适，成活率在75%以上；灭菌5min时全部污染；而灭菌10 min以上时成活率极低，外植体多数或全部被杀死；另外，如果枝条很嫩，灭菌10 min时成活率也不高。
2.2不同激素配比对蓝莓增殖生长的影响
由表2可知，‘杜克’在2号培养基上增殖系数虽然不是最高，为12.8，但生长情况最好，健壮无玻璃化，平均株高最高为4.8 cm；在3号培养基上生长情况也较好，增殖系数为9.7，平均株高3.6 cm；在5号和8号培养基上增殖系数均很高，分别为13.5和14.3，平均株高分别为3.3 cm和4.0 cm，生长虽然健壮但均出现玻璃化现象；在4号和7号培养基上均较瘦弱，增殖系数不高，株高很低，且均出现玻璃化现象；在1号培养基上，虽然没有玻璃化现象，但生长瘦弱，增殖系数不高，为4.3，平均株高也较低，为2.2 cm。 2.3不同培养基对蓝莓生根的影响
由表3可知，在3号培养基上生根率最高，为100%，且平均根长最长，为2.1 cm；在4号培养基上生根率也较高，为90%，平均根长为1.9 cm；在2号和5号培养基上生根率较低，分别为77%和85%，平均根长较短，均为1.7 cm；在1号培养基上生根率最低，仅有57%，且根长也最短，仅有1.1 cm。
2.4试管苗的移栽
由表4可知，当基质为草炭土+蛭石时成活率最高，为92.6%；基质为草炭土+珍珠岩时成活率也较高，为85.3%；基质为草炭土+细河沙时成活率较低，为74%；基质只有草炭土时成活率最低，仅有52.6%，这可能是由于基质透气性差的缘故。
2.5不同培养基硬度和pH对蓝莓试管苗生长的影响
采用3种不同硬度的培养基诱导分化时，茎段直立插入培养基中，采用软硬适中的培养基便于芽的诱导分化；增殖培养采
用的培养基稍软，瓶子倾斜时培养基会慢慢下滑，试管苗躺
在培养基上，便于吸收营养，每个芽点都能分化出丛生苗；生根采用的是液体培养基，更利于营养传送，用滤纸球固定，不用担心苗的直立，移栽洗苗方便取出，不会弄断根系。该试验将pH控制在5.2，丛生芽的分化情况良好。
3 结论与讨论
木本植物组织培养的困难之一是建立无菌体系，消毒的一个基本原则是既要杀死植物材料表面的微生物，同时尽可能不杀死植物材料。该试验表明，对于‘杜克’而言，75%乙醇30 s+0.1%升汞浸泡8～10 min灭菌效果最好，这与孙晓梅等[7]的75%乙醇30 s+0.1%升汞浸泡8 min效果最好一致；对于蓝莓微体繁育而言，玉米素（ZT）是促进其生长分化的主要因素，田新华等[8]认为蓝莓的最适增殖培养基是改良WPM+6BA 1.0 mg/L+ZT 1.0 mg/L，该试验以改良WPM+ZT+TDZ为组合，结果表明‘杜克’最佳增殖培养基为WPM+ZT 1.0 mg/L，加入TDZ后组培苗易出现玻璃化现象，这可能是由于组培苗吸收TDZ后导致体内激素比例失调的原因；张凤生等[1]认为蓝莓的最佳生根培养基为1/2MW+NAA 0.5 mg/L，生根率可达97%，该试验认为1/2WPM+IBA 1.0 mg/L也能很好地诱导生根，生根率达100%，且根系健壮，移栽易成活；移栽时采用草炭土+蛭石成活率最高，可见移栽时必须保证基质的透气性，否则容易烂根，成活率低。
参考文献
[1]
张凤生，鹿娜，姜淼，等.蓝莓组织培养与快速繁育[J].黑龙江农业科学，2009（3）：3-5.
[2] 刘太林.蓝莓组织培养研究进展综述[J].安徽农学通报，2012，18（5）：37-41.
[3] 王新苗，张淑华，索云成，等.矮丛蓝莓茎段组织的培养[J].河南科技学院学报：自然科学版，2013，41（1）：23-27.
[4] 苑兆和.世界蓝莓生产历史与发展趋势[J]. 落叶果树，2003（1）：49-52.
[5] 容祖，郝瑞.浆果学[M].北京：中国农业出版社，1996：59-89.
[6] CHANDLER C K，DRAPER A D.Effect on zeatin and 2ip on shoot proliferation of three highbush blueberry clones in vitro[J].Hortscience，1986，21：1065-1066.
[7] 孙晓梅，王新苗，杨宏光，等.矮丛蓝莓‘北极星’启动培养研究[J].北方园艺，2010（1）：23-26.
[8] 田新华，邢亚娟，张妍妍.蓝莓组织培养及外部因子对其生长的影响[J].黑龙江生态工程职业学院学报，2009，1（1）：19-21.
关键词蓝莓；组织培养；茎段
中图分类号S663.2文献标识码A文章编号0517-6611（2015）10-027-02
Abstract[Objective] The aim was to study rapid propagation of the stem segment of blueberry. [Method]Using stem segment of newshoots as material in autuam，the tissue culture of Northernhighbush Blueberry ‘Bluecrop’ was studied.[Result]Results indicated that the best sterilization time was 8-10 min，the survival rate reached 75%-88%.The best proliferation medium was improved WPM+ZT1.0 mg/L，the proliferation rate reached 12.8，and the average height was 4.8 cm.The best rooting medium was 1/2WPM+IBA1.0 mg/L，the rooting rate reached 100%，the average length was 2.1 cm.The best transplanting medium was peatsoil mixed with vermiculite，the survival rate reached 92.6%.[Conclusion] The study had certain significance for fast breeding and planting of the blueberry.
Key words Blueberry；Tissue culture；Stem segment
蓝莓（Blueberry），又名越橘，属于杜鹃花科乌饭属多年生落叶或常绿果树，呈灌木状生长[1]，果实深蓝色，皮薄，风味酸甜可口，具有防止人体细胞衰老、增强心脏功能、明目及抗癌等独特的保健功效[2-3]，被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一[4]。蓝莓的常规繁育速度较慢，繁殖规模受插条数量的限制，在短期内不能满足生产需要，而且常规手段繁育的苗木在生长势、果实品质等方面与组培苗相比有很多不足之处[5-6]。笔者对蓝莓的组培快繁进行研究，对蓝莓快速繁育和推广种植具有一定的意义[7]。
1 材料与方法
1.1材料及处理
以大连大学引进的美国北高丛蓝莓品种‘杜克’为试材，于4月份取当年生无病虫害生长健壮的枝条，叶片摘除后，将枝条放入加水的容器中，0～4 ℃下冷藏2～3 d，每天换水。接种前，用洗洁精将枝条洗刷干净，剪成3～4 cm的茎段，流水冲洗20 min。
1.2外植体灭菌
在超净工作台上将剪好的茎段用75%乙醇浸泡30 s，无菌水冲洗1次，然后用0.1%的升汞溶液浸泡8～10 min（根据枝条老嫩程度），用无菌水冲洗4～6次，剪去两端与药液接触部分，最后接种于诱导培养基上进行培养。
1.3增殖培养
外植体在诱导培养基上生长20 d后，将带有两三片叶子的茎段剪下接种到增殖培养基中。
1.4生根培养
外植体在增殖培养基上生长20～30 d，达到一定数量后，剪取高2 cm以上的植株接种到生根培养基中，生根培养基采用液体培养基，不加琼脂，加入滤纸球固定植株。
1.5培养基和培养条件
蓝莓诱导及增殖的基本培养基均采用改良WPM基本培养基，生根培养的基本培养基采用1/2WPM，pH 5.2左右，培养条件为温度（25±2） ℃，光照强度1 500～2 000 lx，光照时间14 h/d。
1.6试管苗移栽
在生根培养基中生长30 d左右，试管苗长出数条1 cm以上的新根时，开始炼苗，在自然光下不揭瓶盖炼苗7 d左右，揭开瓶盖，炼苗3 d，每天用小型喷雾器喷水3次以上，保证叶面不失水，3 d以后用清水洗净苗根部附着的培养基，移栽入营养钵内，放入小拱棚，保证温度在25 ℃左右，湿度90%以上。
2 结果与分析
2.1不同灭菌时间对蓝莓诱导分化的影响
由表1可知，春季进瓶时灭菌时间在8～10 min比较合适，成活率在75%以上；灭菌5min时全部污染；而灭菌10 min以上时成活率极低，外植体多数或全部被杀死；另外，如果枝条很嫩，灭菌10 min时成活率也不高。
2.2不同激素配比对蓝莓增殖生长的影响
由表2可知，‘杜克’在2号培养基上增殖系数虽然不是最高，为12.8，但生长情况最好，健壮无玻璃化，平均株高最高为4.8 cm；在3号培养基上生长情况也较好，增殖系数为9.7，平均株高3.6 cm；在5号和8号培养基上增殖系数均很高，分别为13.5和14.3，平均株高分别为3.3 cm和4.0 cm，生长虽然健壮但均出现玻璃化现象；在4号和7号培养基上均较瘦弱，增殖系数不高，株高很低，且均出现玻璃化现象；在1号培养基上，虽然没有玻璃化现象，但生长瘦弱，增殖系数不高，为4.3，平均株高也较低，为2.2 cm。 2.3不同培养基对蓝莓生根的影响
由表3可知，在3号培养基上生根率最高，为100%，且平均根长最长，为2.1 cm；在4号培养基上生根率也较高，为90%，平均根长为1.9 cm；在2号和5号培养基上生根率较低，分别为77%和85%，平均根长较短，均为1.7 cm；在1号培养基上生根率最低，仅有57%，且根长也最短，仅有1.1 cm。
2.4试管苗的移栽
由表4可知，当基质为草炭土+蛭石时成活率最高，为92.6%；基质为草炭土+珍珠岩时成活率也较高，为85.3%；基质为草炭土+细河沙时成活率较低，为74%；基质只有草炭土时成活率最低，仅有52.6%，这可能是由于基质透气性差的缘故。
2.5不同培养基硬度和pH对蓝莓试管苗生长的影响
采用3种不同硬度的培养基诱导分化时，茎段直立插入培养基中，采用软硬适中的培养基便于芽的诱导分化；增殖培养采
用的培养基稍软，瓶子倾斜时培养基会慢慢下滑，试管苗躺
在培养基上，便于吸收营养，每个芽点都能分化出丛生苗；生根采用的是液体培养基，更利于营养传送，用滤纸球固定，不用担心苗的直立，移栽洗苗方便取出，不会弄断根系。该试验将pH控制在5.2，丛生芽的分化情况良好。
3 结论与讨论
木本植物组织培养的困难之一是建立无菌体系，消毒的一个基本原则是既要杀死植物材料表面的微生物，同时尽可能不杀死植物材料。该试验表明，对于‘杜克’而言，75%乙醇30 s+0.1%升汞浸泡8～10 min灭菌效果最好，这与孙晓梅等[7]的75%乙醇30 s+0.1%升汞浸泡8 min效果最好一致；对于蓝莓微体繁育而言，玉米素（ZT）是促进其生长分化的主要因素，田新华等[8]认为蓝莓的最适增殖培养基是改良WPM+6BA 1.0 mg/L+ZT 1.0 mg/L，该试验以改良WPM+ZT+TDZ为组合，结果表明‘杜克’最佳增殖培养基为WPM+ZT 1.0 mg/L，加入TDZ后组培苗易出现玻璃化现象，这可能是由于组培苗吸收TDZ后导致体内激素比例失调的原因；张凤生等[1]认为蓝莓的最佳生根培养基为1/2MW+NAA 0.5 mg/L，生根率可达97%，该试验认为1/2WPM+IBA 1.0 mg/L也能很好地诱导生根，生根率达100%，且根系健壮，移栽易成活；移栽时采用草炭土+蛭石成活率最高，可见移栽时必须保证基质的透气性，否则容易烂根，成活率低。
参考文献
[1]
张凤生，鹿娜，姜淼，等.蓝莓组织培养与快速繁育[J].黑龙江农业科学，2009（3）：3-5.
[2] 刘太林.蓝莓组织培养研究进展综述[J].安徽农学通报，2012，18（5）：37-41.
[3] 王新苗，张淑华，索云成，等.矮丛蓝莓茎段组织的培养[J].河南科技学院学报：自然科学版，2013，41（1）：23-27.
[4] 苑兆和.世界蓝莓生产历史与发展趋势[J]. 落叶果树，2003（1）：49-52.
[5] 容祖，郝瑞.浆果学[M].北京：中国农业出版社，1996：59-89.
[6] CHANDLER C K，DRAPER A D.Effect on zeatin and 2ip on shoot proliferation of three highbush blueberry clones in vitro[J].Hortscience，1986，21：1065-1066.
[7] 孙晓梅，王新苗，杨宏光，等.矮丛蓝莓‘北极星’启动培养研究[J].北方园艺，2010（1）：23-26.
[8] 田新华，邢亚娟，张妍妍.蓝莓组织培养及外部因子对其生长的影响[J].黑龙江生态工程职业学院学报，2009，1（1）：19-21.