【摘 要】
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目的 构建和鉴定Tet-on系统调控的人端粒酶催化亚单位基因腺病毒表达载体.方法 用EcoRⅠ从pGRN145质粒上切下约3.5 kb的人端粒酶全长cDNA片段,然后连于pTRE-shuttle2质粒的Ec
【机 构】
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暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院,518020
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目的 构建和鉴定Tet-on系统调控的人端粒酶催化亚单位基因腺病毒表达载体.方法 用EcoRⅠ从pGRN145质粒上切下约3.5 kb的人端粒酶全长cDNA片段,然后连于pTRE-shuttle2质粒的EcoRⅠ酶切位点,经EcoRⅠ酶切鉴定.亚克隆重组质粒片段于腺病毒载体Adeno-XTM,构建重组Adeno-X-hTERT,以PI-Sce Ⅰ和I-Ceu Ⅰ双酶切、聚合酶链反应(PCR)以及进一步测序鉴定其方向.结果 重组质粒经EcoR Ⅰ酶切后得到预期的3.5、0.88、3.55 kb大小的3条片段,重组腺病毒载体经PI-Sce Ⅰ和I-Ceu Ⅰ双酶切,出现预期32.6、5.09 kb片段,与理论计算值完全一致,PCR及测序结果进一步确认了结构与方向的正确性.结论 成功构建了Tet-on系统调控人端粒酶催化亚单位基因hTERT的重组腺病毒表达载体.
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