【摘 要】
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目的 研究壁虎醇提物(Gekko ethanol extract,GEE)对C6胶质瘤细胞生长的抑制作用,并探讨其分子机制.方法 (1)倒置显微镜下观察细胞形态的改变：不同GEE作用于C6细胞24 h后,观察细胞形态的改变.(2)通过MTT法检测GEE对C6细胞增殖的抑制作用：取对数生长期C6细胞,以5×107· L-1细胞浓度接种于96孔板,每孔200 μL,设置5个复孔.培养24h后加入浓度分
【机 构】
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河南科技大学,河南洛阳471000
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目的 研究壁虎醇提物(Gekko ethanol extract,GEE)对C6胶质瘤细胞生长的抑制作用,并探讨其分子机制.方法 (1)倒置显微镜下观察细胞形态的改变：不同GEE作用于C6细胞24 h后,观察细胞形态的改变.(2)通过MTT法检测GEE对C6细胞增殖的抑制作用：取对数生长期C6细胞,以5×107· L-1细胞浓度接种于96孔板,每孔200 μL,设置5个复孔.培养24h后加入浓度分别为0.05、0.1、0.15、0.2、0.3、0.4g·L-1 GEE培养液,并设置阴性对照组、阳性对照组(0.01 g·L-15-氟尿嘧啶),分别处理20、44、68 h后,每孔加5 g· L-1 MTT溶液20 μL.继续培养4h,然后测定光密度,计算抑制率.(3)通过Hoechst 33258染色法观察细胞核形态学变化.(4) Western blot检测细胞内凋亡相关蛋白(AIF、caspase-9)的表达.结果 MTT结果显示GEE可明显抑制C6细胞的增殖,呈时间和剂量依赖性,作用24、48、72 h后的后其IC50值分别为0.258、0.191、0.159 g·L-1,0.4 g· L-1在72 h抑制率可以达到80.7％.Hoechst 33258染色法观察到药物组和阳性对照组细胞则出现典型的细胞凋亡形态学改变,表现为胞核数量减少,明显缩小,形态不规则,,大小不一,可见呈致密强蓝色荧光团块.Western blot结果显示GEE可诱导AIF、caspase-9蛋白表达随着GEE作用浓度的增加,AIF、Caspase-9蛋白表达逐渐升高.结论 GEE可抑制C6细胞增殖并诱导其凋亡,诱导凋亡机制可能与AIF、caspase-9蛋白的表达增加有关.
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