探讨前列腺癌细胞内肿瘤坏死因子α诱导蛋白8(TNFAIP8)的表达变化对其侵袭与转移能力的影响,及在此过程中有无上皮-间充质转化(EMT)参与。
方法设计合成靶向抑制TNFAIP8基因的短发卡RNA(shRNA)慢病毒质粒(shTNFAIP8),转染前列腺癌PC3细胞,分为shTNFAIP8组(转染TNFAIP8 shRNA),空载细胞组(转染对照shRNA)和阴性对照组(未转染),反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测3组TNFAIP8和EMT相关标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和紧密连接蛋白(ZO1) mRNA及蛋白表达水平,通过细胞划痕和Transwell小室侵袭实验检验3组细胞侵袭与转移能力。组间比较采用t检验。
结果shTNFAIP8组Vimentin和N-cadherin mRNA及蛋白表达量(0.51±0.17、0.32±0.11、0.29±0.04、0.25±0.05)明显低于阴性对照组(1.00±0.32、1.00±0.23、0.63±0.10、0.65±0.07,t= 3.024、5.964、7.059、10.401,P<0.05)及空载细胞组(1.00±0.26、1.00±0.26、0.61±0.13、0.63±0.08,t=3.527、5.386、5.261、9.007,P<0.05),而E-cadherin和ZO1 mRNA及蛋白表达量(4.21±1.12、2.70±0.87、0.49±0.07、0.52±0.08)明显高于阴性对照组(1.00±0.14、1.00±0.26、0.31±0.06、0.39±0.05,t= 6.359、4.186、4.679、3.081,P<0.05)及空载细胞组(1.00±0.21、1.00±0.24、0.27±0.05、0.39±0.07,t=6.299、4.212、5.719、2.735,P<0.05),差异有统计学意义。shTNFAIP8组24 h后的划痕愈合百分比[(0.72±0.12)%]高于阴性对照组[(0.52±0.11)%]及空载细胞组[(0.53±0.12)%],差异有统计学意义(t=2.747、2.372,P<0.05)。shTNFAIP8组穿膜细胞数[(52±17)个]少于阴性对照组[(141±34)个]及空载细胞组[(150±45)个],差异有统计学意义(t=5.235、4.555,P<0.05)。
结论下调表达TNFAIP8可通过调控EMT抑制前列腺癌细胞的侵袭与转移。