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青霉素结合蛋白2aC-末端在大肠杆菌M15中的表达、纯化及鉴定

来源 :创伤外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：aa87850011
【摘 要】
：
目的构建含目的基因mecA C末端的重组子并在大肠杆菌M15中进行蛋白表达。方法采用PCR方法扩增mecA C末端DNA，将其与表达载体pQE30连接；再通过PCR及双酶切鉴定连接产物。将含目
【作 者】
：
和生琦 丁国富 李斌 李军 罗平 董燕 张蓉 颜伟 周红 
【机 构】
：
第三军医大学药理教研室
【出 处】
：
创伤外科杂志
【发表日期】
：
2007年1期
【关键词】
：
金黄色葡萄球菌 青霉素结合蛋白2A 大肠杆菌 MECA基因 MRSA PBP2a E. coli mecA gene 
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目的构建含目的基因mecA C末端的重组子并在大肠杆菌M15中进行蛋白表达。方法采用PCR方法扩增mecA C末端DNA，将其与表达载体pQE30连接；再通过PCR及双酶切鉴定连接产物。将含目的基因片段的阳性重组质粒转化大肠杆菌M15后，用1mmol／L的IPTG进行诱导表达。应用Ni-NTA琼脂糖进行亲和层析纯化目的蛋白，并用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行鉴定。结果成功构建pQE30-mecA重组表达质粒，转化大肠杆菌M15，经IPTG诱导表达，亲和层析纯化获得分子量为
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