论文部分内容阅读
目的
利用浓度梯度倍增的氧氟沙星(Ofx)体外诱导获得结核分枝杆菌(MTB)耐药株，进一步研究MTB对氟喹诺酮类(FQs)药物的耐药稳定性变化，初步分析其耐药发生发展的分子机制和突变特点。
方法选取MTB标准株H37RV和24株临床分离Ofx敏感株，在Ofx浓度递增的含药液体培养基中进行传代培养，诱导菌株对Ofx的耐药性，微量最低抑菌浓度(MIC)检测法测定FQs药物的MIC变化情况，测序鉴定gyrA基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)的突变情况，分析不同突变位点与耐药程度的关系。将6株临床分离Ofx耐药株和体外诱导耐药株，在无药培养基连续传代培养观察耐药稳定性变化，包括MIC变化及gyrA基因突变情况。
结果在24株临床分离Ofx敏感株中，有21株诱导后MIC值是诱导前8倍以上，成功诱导为耐药株，且对左氧氟沙星、莫西沙星也发生交叉耐药，测序除1株未检测到突变，其余均检测到gyrA基因QRDR的热点突变，其中94位突变占60%(12/20)，且相应半数最低抑菌浓度(MIC50)达8 μg/ml以上。6株临床分离耐药菌株中，有4株发生90位突变，占67%，但相应MIC50仅为2 μg/ml。临床分离耐药株无药连续传代21代，MIC值无明显变化，突变点未发生变化；诱导耐药株无药连续传代11代，MIC值无明显变化，3株菌QRDR区发生新的突变。
结论通过Ofx体外诱导试验可以获得对3种FQs药物均耐药的MTB耐药菌株；gyrA基因QRDR 88、94位突变与MTB对FQs的高水平耐药相关；MTB对FQs药物的耐药稳定性较强，较难复敏。