【摘 要】
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目的通过沉默microRNA(miRNA)-30c研究miRNA-30c对P19细胞增殖及分化功能的影响。方法将成功构建的miRNA-30c沉默质粒(miRNA-30c沉默组)与空载质粒(阴性对照组)通过lipo2000法分别转染P19细胞，荧光表达观察质粒转染效率；通过杀稻瘟菌素Blasticidin筛选出miRNA-30c沉默稳定表达的P19细胞株；使用双荧光素酶报告基因间接验证成功沉默稳定表
【机 构】
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210004 南京医科大学 南京医科大学附属南京妇幼保健院儿科,南京医科大学附属南京妇幼保健院儿科,南京医科大学附属南京妇幼保健院儿科,南京医科大学附属南京妇幼保健院儿科,南京医科大学附属南京妇幼保健
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目的通过沉默microRNA(miRNA)-30c研究miRNA-30c对P19细胞增殖及分化功能的影响。
方法将成功构建的miRNA-30c沉默质粒(miRNA-30c沉默组)与空载质粒(阴性对照组)通过lipo2000法分别转染P19细胞，荧光表达观察质粒转染效率；通过杀稻瘟菌素Blasticidin筛选出miRNA-30c沉默稳定表达的P19细胞株；使用双荧光素酶报告基因间接验证成功沉默稳定表达的P19细胞株；细胞增殖(CCK-8)法检测细胞增殖活性；使用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞分化；倒置显微镜观察细胞分化形态变化；使用聚合酶链反应检测心肌分化标志基因(cTnT、NKX2.5、GATA4)的核酸表达水平。
结果通过荧光表达观察到质粒成功转染入P19细胞；双荧光素酶报告基因提示miRNA-30c沉默显著解除了miRNA-30c对靶基因Gli2的抑制作用，细胞株成功建立(P<0.001)；P19细胞分化过程中，倒置显微镜观察到miRNA-30c沉默组跳动心肌细胞的数量及频率均低于阴性对照组；检测心肌标志物发现miRNA-30c沉默组心肌细胞分化数量、标志基因表达均显著低于阴性对照组(P均<0.05)。
结论miRNA-30c沉默可以显著抑制P19细胞增殖功能，并抑制其向心肌细胞的分化，为其用于心脏发育的进一步研究奠定基础。
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