【摘 要】
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目的:阐明丹参川芎嗪注射液影响脑梗死诱导的星形胶质细胞活化和炎症反应的分子机制.方法:采用无糖无氧(95％ N2、5％ CO2)处理人星形胶质细胞(Human Astroglia,HA)构建糖氧剥夺(Oxygen glucose deprivation)模型,并用丹参川芎嗪注射液处理分别转染了miR-145-5p inhibitor、miR-145-5p mimics或pcDNA-PLA2G4A的氧糖剥夺模型细胞,采用CCK-8检测细胞活力及丹参川芎嗪注射液的毒性;RT-qPCR检测miR-145-5p水
【机 构】
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上海邮电医院,上海200040;上海中医药大学科技人文研究院,上海201203;上海中医药大学科技实验中心,上海201203;上海中医药大学科技人文研究院,上海201203;上海中医药大学康复医学院,
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目的:阐明丹参川芎嗪注射液影响脑梗死诱导的星形胶质细胞活化和炎症反应的分子机制.方法:采用无糖无氧(95％ N2、5％ CO2)处理人星形胶质细胞(Human Astroglia,HA)构建糖氧剥夺(Oxygen glucose deprivation)模型,并用丹参川芎嗪注射液处理分别转染了miR-145-5p inhibitor、miR-145-5p mimics或pcDNA-PLA2G4A的氧糖剥夺模型细胞,采用CCK-8检测细胞活力及丹参川芎嗪注射液的毒性;RT-qPCR检测miR-145-5p水平;Western blotting检测星形胶质细胞活化标志物(GFAP及S100B)及磷脂酶A2-4A(Phospholipase A2-4A,PLA2G4A)蛋白表达;ELISA检测炎症因子TNF-α及IL-1β水平;双荧光素酶报告基因验证miR-145-5p和PLA2G4A的靶向关系.结果:CCK-8检测结果表明,随着氧糖剥夺处理时间增加,HA细胞活力逐渐降低,氧糖剥夺处理时间大于24h后细胞活力低于50％ (P＜0.01),因此在本研究中采用氧糖剥夺处理24h用于构建氧糖剥夺模型细胞模型.CCK-8检测氧糖剥夺模型HA细胞在不同浓度丹参川芎嗪注射液(0、1、5、10、20、30 mL/L)处理下的细胞毒性,后续实验中采用10 mL/L丹参川芎嗪注射液处理细胞.与正常对照组相比,模型对照组GFAP、S100B蛋白明显上调,TNF-α和IL-1β含量明显升高(P＜0.05);与模型对照组相比,丹参川芎嗪注射液10 mL/L组GFAP、S100B蛋白明显下调,TNF-α和IL-1β含量明显降低(P＜0.05);与丹参川芎嗪注射液10 mL/L组相比,敲降miR-145-5p或过表达PLA2G4A均可削弱丹参川芎嗪注射液的抑制作用(P＜0.05);由于miR-145-5p可靶向下调氧糖剥夺模型HA细胞中PLA2G4A(P＜0.01),因此,过表达miR-145-5p可抵消过表达PLA2G4A对丹参川芎嗪注射液作用的削弱(P＜0.05).结论:丹参川芎嗪注射液通过上调糖氧剥夺模型星形胶质细胞中miR-145-5p抑制PLA2G4A表达,抑制细胞活化及炎症反应.
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