【摘 要】
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为探索利用CRISPR/Cas9系统在拟南芥中进行大片段基因敲除并产生回复突变的可行性及其工作效率,进一步精准验证靶基因在植物的生长发育中以及响应逆境胁迫中所起的作用.本研
【机 构】
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广东石油化工学院生物与食品工程学院,茂名,525000;喀什大学生命与地理科学学院,叶尔羌绿洲生态与生物资源研究高校重点实验室,喀什,844000;广东石油化工学院生物与食品工程学院,茂名,52500
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为探索利用CRISPR/Cas9系统在拟南芥中进行大片段基因敲除并产生回复突变的可行性及其工作效率,进一步精准验证靶基因在植物的生长发育中以及响应逆境胁迫中所起的作用.本研究利用同源重组法将sgRNA和编码Cas9的序列快速连接构建表达载体,同时在载体两端装载缺失片段的同源臂以提供同源重组修复时所需的模板.结果 显示,敲除ASⅠ基因的表达载体pHDE-ASⅠ-mCherry重组子阳性率为100％,同源修复载体pHDE-ASⅠ-EcoRⅠ-mCherry为90.9％,且经测序验证,利用同源重组法所构建的表达载体序列无突变,与原序列高度一致,从而实现了同源修复载体的构建.本研究为精准验证靶基因的功能提供了技术指导.
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