【摘 要】
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目的探讨硫醚环化B螺旋肽（thioether-cyclized helix B peptide, CHBP）对脓毒症导致急性肺损伤（acute lung injury，ALI）的保护作用及其潜在机制。方法30只SPF级6~8周龄C57BL/6J雄性小鼠随机（随机数字表法）分为三组：空白对照组、脓毒症致ALI组和CHBP预处理组（10 nmol/kg）。在ALI发生18 h后，通过免疫组化检测肺组织
【机 构】
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复旦大学附属中山医院重症医学科，上海 200032,复旦大学附属中山医院泌尿外科，上海 200032;上海市器官移植重点实验室 200032,复旦大学附属中山医院重症医学科，上海 200032,复旦大
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目的探讨硫醚环化B螺旋肽（thioether-cyclized helix B peptide, CHBP）对脓毒症导致急性肺损伤（acute lung injury，ALI）的保护作用及其潜在机制。
方法30只SPF级6~8周龄C57BL/6J雄性小鼠随机（随机数字表法）分为三组：空白对照组、脓毒症致ALI组和CHBP预处理组（10 nmol/kg）。在ALI发生18 h后，通过免疫组化检测肺组织caspase-3阳性表达，通过免疫荧光检测肺组织TUNEL阳性率。体外培养小鼠肺上皮细胞（MLE-12）并分为对照组、脂多糖（LPS）组和CHBP预处理组（10 nmol/L）。刺激24 h后，ELISA检测细胞上清液的炎症因子水平，通过荧光TUNEL法检测各组细胞的凋亡比例以及用Western blot检测caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白的表达水平。使用Graphpad prism 7软件对数据进行单因素方差分析。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
结果LPS组小鼠出现明显ALI症状和肺组织病理改变。CHBP预处理组肺组织TUNEL阳性细胞数量（个/mm2）少于LPS组，差异有统计学意义[(22±2) vs (39.46±4.51)，P=0.001]。CHBP预处理组肺组织caspase-3阳性细胞数（个/mm2）少于LPS组[(28.67±5.29) vs (52.87±3.76)，P=0.029]。在体外实验中，相比LPS组，CHBP预处理明显抑制MLE-12细胞上清液炎症因子IL-6（pg/mL）[(70.64±5.59) vs (123.10±15.71)，P=0.027]，IL-1β（pg/mL）[(67.11±3.39) vs (100.70±7.61)，P=0.007]和TNF-α（pg/mL）[(76.98±7.97) vs (138.50±13.12)，P=0.007]的表达，抑制了凋亡相关蛋白caspase-3 [(0.085±0.063) vs (1.198±0.058)，P=0.01]以及Bax[(0.562±0.026) vs (0.781±0.044)，P=0.041]的表达，减少细胞凋亡，并且这一趋势与MLE-12细胞荧光TUNEL检测结果[CHBP预处理组(30.33±1.86) vs LPS组(45.00±2.88)，P=0.006]一致。
结论CHBP预处理可以减轻脓毒症导致的ALI，这一保护作用很可能是通过抑制炎症反应，减少肺上皮细胞凋亡实现的。
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