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以双质粒逆病毒载体系统快速建立梯度过表达hMTA1稳转单克隆细胞系的方法

来源 :癌症进展 | 被引量 : 0次 | 上传用户：HanMa_1978

【摘 要】

：

目的利用逆病毒表达载体快速构建梯度过表达人MTA1稳转单克隆细胞系。方法利用噬菌斑原位杂交筛选人肺噬菌体文库，以阳性克隆为模板，RT-PCR获得人MTA1完整CDS序列。以逆病毒表

【作 者】

：

刘健 王海娟 张金龙 常亚楠 孟希亭 张雪燕 梁肖 付明 赵 

【机 构】

：

中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室,首都医科大学附属北京妇产医院

【出 处】

：

癌症进展

【发表日期】

：

2012年3期

【关键词】

：

MTA1 GFP 逆病毒 稳转 梯度过表达 单克隆 MTA1 GFP retrovirus stable transfection gradient overe 

【基金项目】

：

国家自然科学基金项目（项目编号：81071773）,北京协和医学院研究生创新基金（项目编号：2010-1001-014）

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目的利用逆病毒表达载体快速构建梯度过表达人MTA1稳转单克隆细胞系。方法利用噬菌斑原位杂交筛选人肺噬菌体文库，以阳性克隆为模板，RT-PCR获得人MTA1完整CDS序列。以逆病毒表达载体pMX为基础，经过多次酶切连接，构建逆病毒表达载体pMX—MTA1-flag—IRES—EGFP。将构建好的逆病毒载体系统，转染293-gag／pol细胞，包装出含该表达载体的逆病毒颗粒。以含病毒上清多次感染HCT116细胞，获得稳定转染MTA1的HCT116多克隆细胞系。将该多克隆细胞系按合适比例稀释后接种至10cm大皿

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