【摘 要】
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目的 克隆并表达抑制新城疫病毒(NDV)繁殖的九肽(Nonapeptide)及其突变体基因.方法 设计并合成Nonapeptide 2串联体及其突变体基因,克隆于质粒pUC18,经酶切回收目的 基因,与
【机 构】
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兰州大学基础医学院医学生物化学与分子生物学研究所,兰州,730000
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目的 克隆并表达抑制新城疫病毒(NDV)繁殖的九肽(Nonapeptide)及其突变体基因.方法 设计并合成Nonapeptide 2串联体及其突变体基因,克隆于质粒pUC18,经酶切回收目的 基因,与经相同酶切的表达载体pGEX-4T-1连接,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性菌落,抽提质粒进行鉴定.IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE及Western blot鉴定.结果 重组表达质粒经双酶切、PCR及测序鉴定,证明构建正确.阳性重组菌的诱导表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约29 000处可见一明显条带,与理论值相符.Nonapeptide 2及其突变体蛋白的表达量分别占菌体总蛋白的41%和37%.Western blot结果显示两种蛋白均具有良好的反应原性.结论 已成功克隆并表达了抗NDV繁殖的Nonapeptide及其突变体基因.
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