【摘 要】
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目的:分离培养近交系五指山小型猪骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs),并建立其慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)模型,体外研究同物种BM-
【机 构】
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中南大学湘雅医学院附属海口医院泌尿外科,海口,570208中南大学湘雅医学院附属海口医院中心实验室,海口,570208;成都市第二人民医院泌尿外科,成都,610000;中南大学湘雅医学院附属海口医院B
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目的:分离培养近交系五指山小型猪骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs),并建立其慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)模型,体外研究同物种BM-MSCs对CKD肾纤维化的修复作用及其可能机制.方法:采用密度梯度法分离培养BM-MSCs,并从细胞形态、表面抗原、分化能力等方面鉴定;采用左侧输尿管部分梗阻(left partial ureteral obstruction,LPUUO)方法制作CKD模型,并通过B超、单光子发射计算机断层成像术(single-photon emission computed tomography,SPECT)、病理染色等评估;体外实验分为肾组织与BM-MSCs共培养、肾组织单独培养、BM-MSCs单独培养3组,体外培养7d,每天收集3组上清液,酶联免疫吸附法测定肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)累积分泌量.肾组织行HE染色,Masson染色.结果:分离培养的BM-MSCs表达抗原CD29,CD90而不表达CD45,成骨诱导茜素红染色阳性,成软骨诱导阿利新蓝染色阳性.LPUUO术后12周,B超示左肾皮质变薄、肾盂积液;SPECT示左肾充盈延迟、梗阻性肾功能受损.上清液HGF累积含量示BM-MSCs+CKD肾组织共同培养组第1,5,6,7天HGF累积分泌量明显高于CKD肾组织单独培养组(P＜0.05).HE染色显示BM-MSCs+CKD肾组织共同培养组和CKD肾组织单独培养组中肾均出现不同程度的病变,并随时间延长加重,但CKD肾组织单独培养组病变更严重;Masson染色显示BM-MSCs+CKD肾组织共同培养组术后第5,6,7天肾组织被染成蓝色的胶原纤维的累计光密度值明显低于CKD肾组织单独培养组(P＜0.05).结论:近交系五指山小型猪BM-MSCs体外分泌HGF,抑制或延缓CKD纤维化进展.
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