论文部分内容阅读
摘要：目的：观察黄瓜香对兔离体小肠运动的影响并探讨其作用机制。方法：以家兔离体小肠平滑肌收缩强度为指标，观察黄瓜香水提液对肠平滑肌运动的影响。结果：黄瓜香水提液（0．04mg·ml-1、0．16mg·ml-1、0．33mg·ml-1、0．41mg·ml-1、0．67mg·ml-1及1．33mg·ml-1）均能显著抑制家兔离体小肠的自发活动使收缩力降低，紧张性下降，并存在明显的剂量依赖关系。黄瓜香对乙酰胆碱、新斯的明、氯化钡、酚妥拉明引起的收缩加强均有显著的拮抗作用；能使先用阿托品、多巴胺而降低离体兔小肠进一步松弛，具有协同作用。结论：黄瓜香水提液能抑制家兔离体小肠运动，并存在明显的剂量依赖关系。黄瓜香抑制家兔小肠平滑肌运动的作用，可能由胃肠道的胆碱受体介导，或直接作用于小肠平滑肌细胞，与激动肠肌多巴胺受体无明显关系。
关键词：黄瓜香 离体小肠 收缩活动 胆碱受体 多巴胺受体
黄瓜香学名蔓茎堇菜、葡匐堇，属堇菜科，堇菜属(Viola diffusa Ging)多年生草本植物。化学成分主要为黄酮、糖类、粘液质［1］等。目前有关黄瓜香的研究主要集中在血液系统、抗氧化及成分分析［2，3，4］，但有关黄瓜香对胃肠运动的影响未见报道，本研究通过黄瓜香水提物对兔离体小肠运动的影响，探讨其胃肠道药理作用及可能的机制。
1 实验材料
1．1 试验药物
原植物采至湖南省吉首市市郊，经吉首大学医学院李仕福副主任药师鉴定。黄瓜香采用水提蒸馏浓缩至含生药1g·L-1备用，以下均以生药计。
1．2 试剂
甲硫酸新斯的明注射液，山东天福制药厂，批号：0601051；硫酸阿托品注射液，徐州莱恩药业有限公司，批号：0306301；甲磺酸酚妥拉明注射液，上海旭东海普药业有限公司，批号060301；氯化乙酰胆碱，上海三爱思试剂有限公司，批号：20030620；氯化钡，北京市红星化工厂；批号：930319-1；盐酸多巴胺注射液，广州明兴制药有限公司，批号MD2101。
1．3 实验动物
新西兰种家兔，由吉首大学医学实验动物中心提供。
1．4 实验仪器
HW-400恒温平滑肌槽、BL-420E生物机能实验系统，均为成都泰盟科技有限公司产品。
2 实验方法
2．1 离体家兔小肠平滑肌的制备
按文献［6］方法制备离体兔肠平滑肌标本，实验时将肠段置于充满30ml台氏液(37±0．5℃)的HW-400恒温平滑肌槽浴槽中，持续通气，肠段两端分别固定于通气钩及张力换能器上，张力换能器起始负荷1g，待肠段自发性舒缩稳定后描记肠管正常运动曲线。进行实验时，用微量加样器向浴槽中加入各种药液，1∶10 000氯化乙酰胆碱、20%氯化钡、10mg·ml-1多巴胺、10mg·ml-1酚妥拉明、0．5mg·ml-1阿托品及10mg·ml-1新斯的明，每次给药体积0．2ml，描记舒缩曲线后，立即用台氏液冲洗2～3次，待肠段舒缩恢复正常后进行下一次给药，无法恢复正常舒缩的肠段弃去。小肠运动曲线稳定后加入药物，观察给不同浓度的黄瓜香水提物给药前后曲线变化情况，实验结束后保存记录文件，用区间测量法测量给药前3min和给药后3min的平均张力，并根据平均张力值计算变化百分率，变化百分率=（给药前平均张力-给药后平均张力）/给药前平均张力×100［7］，负值为抑制，正值为兴奋。
2．2 数据处理
所得数据输入SPSS13．0软件包，结果以表示，数据采用方差分析，组间比较用q检验。
3 实验结果
3．1 黄瓜香对正常兔离体小肠运动的影响
不同浓度的黄瓜香水提物(0．04mg·ml-1、0．16mg·ml-1、0．33mg·ml-1、0．41mg·ml-1、0．67mg·ml-1及1．33mg·ml-1终浓度)对家兔离体小肠平滑肌运动均具有不同程度的抑制作用，并呈现明显的剂量依赖关系（见表1）。但当槽内浓度低于0．33mg·ml-1以下时，则无显著性差异，在0．33mg·ml-1浓度以上时有差异显著性（P<0．05，P<0．01）。
3．2．1 拮抗乙酰胆碱、氯化钡、新斯的明及酚妥拉明的作用
黄瓜香水提物在终浓度为0．67mg·ml-1时，均能拮抗氯化钡、新斯的明、乙酰胆碱、酚妥拉明增强小肠平滑肌运动的作用。表现为紧张性（张力）下降，振幅减弱，拮抗氯化钡、新斯的明、乙酰胆碱、酚妥拉明的作用强度按顺序依次递减，这种抑制作用与给药前比较，均有显著差别（P<0．01），实验结果见表2。但新斯的明对经黄瓜香孵育的离体肠管不能增强小肠平滑肌的运动。
3．2．2 协同阿托品、多巴胺的作用
黄瓜香水提物在终浓度为0．67mg·ml-1时，均能使先用阿托品、多巴胺而紧张性已降低的兔小肠平滑肌进一步松弛，振幅进一步减弱。黄瓜香水提物虽对阿托品有一定协同作用但差异不明显(P﹥0．05)，黄瓜香水提物和阿托品总抑制率与单纯阿托品的抑制率比较有显著性(P<0．05)。而黄瓜香水提物在0．67mg·ml-1浓度时协同多巴胺对肠管的总抑制率与单纯多巴胺对肠管的抑制率比较均有显著性差异(P<0．01)。实验结果见表3：
4 讨论
胃肠运动的调节由交感神经、副交感神经系统和存在肠壁内的肠神经系统控制［8］。目前研究认为胃肠道上主要存在胆碱能M受体、肾上腺素α受体和β受体、组胺受体及多种胃肠激素受体［8］。本实验选取相关实验项目，对药物作用及其作用机制进行探讨研究。现就实验结果分析如下。
4．1 黄瓜香对正常肠管的影响
生理状态下，胃肠道运动受自主神经壁内神经丛的支配。一定剂量的黄瓜香对胃肠运动表现为抑制作用。在被试不同剂量的黄瓜香对正常离体肠管均具有不同程度的抑制作用，并且其抑制作用呈剂量依赖性增加，当黄瓜香剂量达0．33mg·ml-1以上则有非常显著性差异(P＜0．05或P＜0．01)，提示在与中枢神经、体液调控脱离的条件下，黄瓜香对离体肠管有显著的抑制作用。
4．2 黄瓜香对胆碱能递质系统的影响
乙酰胆碱是平滑肌内兴奋传递的化学物质，能激动M胆碱能受体，兴奋胃肠道，使其收缩的幅度、张力增加。新斯的明是抗胆碱酯酶药，抑制胆碱酯酶水解乙酰胆碱活性，发挥完全拟胆碱作用。黄瓜香在离体实验中对各种乙酰胆碱和新斯的明的影响在一定程度上体现了胆碱能系统的药理作用机制。黄瓜香对乙酰胆碱所致的兔离体肠痉挛有显著的抑制作用。另外，黄瓜香能抑制新斯的明所致离体肠管痉挛，但新斯的明对经黄瓜香孵育的离体肠管不能引起收缩亢进，提示黄瓜香对平滑肌上胆碱能受体的拮抗作用，可能不是单纯通过拟胆碱酯酶或直接影响胆碱酯酶的功能。阿托品为M-R受体阻断剂，黄瓜香与阿托品对小肠平滑肌有协同抑制作用，进一步说明黄瓜香对平滑肌的抑制作用不单纯是通过阻断M-R受体所致。
4．3 黄瓜香对平滑肌兴奋——收缩偶联的影响
Ca2+在介导平滑肌收缩反应中起核心作用，通过兴奋——收缩偶联过程而实现。氯化钡是通过促进细胞内Ca2+的释放而引起肠管平滑肌痉挛［10］。黄瓜香能对抗氯化钡所致肠管痉挛，提示其具有钙拮抗作用。但黄瓜香对抗氯化钡所致痉挛是否与其有关，有待进一步的研究。
4．4 黄瓜香对多巴胺受体协同作用
多巴胺激动肠平滑肌上D受体，抑制肠道平滑肌的运动，黄瓜香能协同多巴胺抑制肠道平滑肌的运动。但黄瓜香对经酚妥拉明孵育的离体肠管仍有显著的抑制，说明对肠管α受体的阻断作用不影响黄瓜香对肠管平滑肌的抑制作用，怀疑其抑制作用可能与激动α受体无关［11］。
综上所述，黄瓜香对于离体平滑肌的抑制作用机制可能与其抗M胆碱能受体、钙拮抗作用有关，但与激动肠肌多巴受体无明显关系。
参考文献
1 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志:第五十一卷［M］.北京:科学出版社，1991：100~101
2 魏云.蔓茎堇菜对外周血细胞数及骨髓细胞数的影响［J］.湖南医学，1994，5(11)：80~82
3 彭源贵.蔓茎堇菜升高白细胞的有效成分［J］.中草药，1991，22(9)：426
4 陈由强，林国宇等.蔓茎堇菜总黄酮含量的测定［J］.福建师范大学学报(自然科学版)，2000，4(16)：67~69
5 李先辉等，黄氧瓜香水提物体外抗化活性实验吉首大学学报(自然科学版)，2006，（5）：100~102
6 陈奇.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社，1996：332
7 杜鹃等.银杏叶提取物对小肠运动的实验研究浙江中医杂志2003年12月号537~538
8 张三印，杨鹏，等.胃肠运动障碍的发病机制和证治［J］.中医药学刊，2003，21（2）：209~211
9 官福兰，王汝俊，王建华.桔壳及辛弗林对兔离体小肠运动影响的研究［J］.中药药理与临床，2002，18(2)：9211
10 黄锦梅，等.黄连解毒汤对胃肠道影响的实验研究［J］.中药药理与临床，1994，(2)：829
11 戴媛媛，刘保林，窦昌贵.吴茱萸氯仿提取物对胃排空的影响［J］.中药药理与临床，2003，19(3)：16~19
(收稿日期：2007年6月20日)
关键词：黄瓜香 离体小肠 收缩活动 胆碱受体 多巴胺受体
黄瓜香学名蔓茎堇菜、葡匐堇，属堇菜科，堇菜属(Viola diffusa Ging)多年生草本植物。化学成分主要为黄酮、糖类、粘液质［1］等。目前有关黄瓜香的研究主要集中在血液系统、抗氧化及成分分析［2，3，4］，但有关黄瓜香对胃肠运动的影响未见报道，本研究通过黄瓜香水提物对兔离体小肠运动的影响，探讨其胃肠道药理作用及可能的机制。
1 实验材料
1．1 试验药物
原植物采至湖南省吉首市市郊，经吉首大学医学院李仕福副主任药师鉴定。黄瓜香采用水提蒸馏浓缩至含生药1g·L-1备用，以下均以生药计。
1．2 试剂
甲硫酸新斯的明注射液，山东天福制药厂，批号：0601051；硫酸阿托品注射液，徐州莱恩药业有限公司，批号：0306301；甲磺酸酚妥拉明注射液，上海旭东海普药业有限公司，批号060301；氯化乙酰胆碱，上海三爱思试剂有限公司，批号：20030620；氯化钡，北京市红星化工厂；批号：930319-1；盐酸多巴胺注射液，广州明兴制药有限公司，批号MD2101。
1．3 实验动物
新西兰种家兔，由吉首大学医学实验动物中心提供。
1．4 实验仪器
HW-400恒温平滑肌槽、BL-420E生物机能实验系统，均为成都泰盟科技有限公司产品。
2 实验方法
2．1 离体家兔小肠平滑肌的制备
按文献［6］方法制备离体兔肠平滑肌标本，实验时将肠段置于充满30ml台氏液(37±0．5℃)的HW-400恒温平滑肌槽浴槽中，持续通气，肠段两端分别固定于通气钩及张力换能器上，张力换能器起始负荷1g，待肠段自发性舒缩稳定后描记肠管正常运动曲线。进行实验时，用微量加样器向浴槽中加入各种药液，1∶10 000氯化乙酰胆碱、20%氯化钡、10mg·ml-1多巴胺、10mg·ml-1酚妥拉明、0．5mg·ml-1阿托品及10mg·ml-1新斯的明，每次给药体积0．2ml，描记舒缩曲线后，立即用台氏液冲洗2～3次，待肠段舒缩恢复正常后进行下一次给药，无法恢复正常舒缩的肠段弃去。小肠运动曲线稳定后加入药物，观察给不同浓度的黄瓜香水提物给药前后曲线变化情况，实验结束后保存记录文件，用区间测量法测量给药前3min和给药后3min的平均张力，并根据平均张力值计算变化百分率，变化百分率=（给药前平均张力-给药后平均张力）/给药前平均张力×100［7］，负值为抑制，正值为兴奋。
2．2 数据处理
所得数据输入SPSS13．0软件包，结果以表示，数据采用方差分析，组间比较用q检验。
3 实验结果
3．1 黄瓜香对正常兔离体小肠运动的影响
不同浓度的黄瓜香水提物(0．04mg·ml-1、0．16mg·ml-1、0．33mg·ml-1、0．41mg·ml-1、0．67mg·ml-1及1．33mg·ml-1终浓度)对家兔离体小肠平滑肌运动均具有不同程度的抑制作用，并呈现明显的剂量依赖关系（见表1）。但当槽内浓度低于0．33mg·ml-1以下时，则无显著性差异，在0．33mg·ml-1浓度以上时有差异显著性（P<0．05，P<0．01）。
3．2．1 拮抗乙酰胆碱、氯化钡、新斯的明及酚妥拉明的作用
黄瓜香水提物在终浓度为0．67mg·ml-1时，均能拮抗氯化钡、新斯的明、乙酰胆碱、酚妥拉明增强小肠平滑肌运动的作用。表现为紧张性（张力）下降，振幅减弱，拮抗氯化钡、新斯的明、乙酰胆碱、酚妥拉明的作用强度按顺序依次递减，这种抑制作用与给药前比较，均有显著差别（P<0．01），实验结果见表2。但新斯的明对经黄瓜香孵育的离体肠管不能增强小肠平滑肌的运动。
3．2．2 协同阿托品、多巴胺的作用
黄瓜香水提物在终浓度为0．67mg·ml-1时，均能使先用阿托品、多巴胺而紧张性已降低的兔小肠平滑肌进一步松弛，振幅进一步减弱。黄瓜香水提物虽对阿托品有一定协同作用但差异不明显(P﹥0．05)，黄瓜香水提物和阿托品总抑制率与单纯阿托品的抑制率比较有显著性(P<0．05)。而黄瓜香水提物在0．67mg·ml-1浓度时协同多巴胺对肠管的总抑制率与单纯多巴胺对肠管的抑制率比较均有显著性差异(P<0．01)。实验结果见表3：
4 讨论
胃肠运动的调节由交感神经、副交感神经系统和存在肠壁内的肠神经系统控制［8］。目前研究认为胃肠道上主要存在胆碱能M受体、肾上腺素α受体和β受体、组胺受体及多种胃肠激素受体［8］。本实验选取相关实验项目，对药物作用及其作用机制进行探讨研究。现就实验结果分析如下。
4．1 黄瓜香对正常肠管的影响
生理状态下，胃肠道运动受自主神经壁内神经丛的支配。一定剂量的黄瓜香对胃肠运动表现为抑制作用。在被试不同剂量的黄瓜香对正常离体肠管均具有不同程度的抑制作用，并且其抑制作用呈剂量依赖性增加，当黄瓜香剂量达0．33mg·ml-1以上则有非常显著性差异(P＜0．05或P＜0．01)，提示在与中枢神经、体液调控脱离的条件下，黄瓜香对离体肠管有显著的抑制作用。
4．2 黄瓜香对胆碱能递质系统的影响
乙酰胆碱是平滑肌内兴奋传递的化学物质，能激动M胆碱能受体，兴奋胃肠道，使其收缩的幅度、张力增加。新斯的明是抗胆碱酯酶药，抑制胆碱酯酶水解乙酰胆碱活性，发挥完全拟胆碱作用。黄瓜香在离体实验中对各种乙酰胆碱和新斯的明的影响在一定程度上体现了胆碱能系统的药理作用机制。黄瓜香对乙酰胆碱所致的兔离体肠痉挛有显著的抑制作用。另外，黄瓜香能抑制新斯的明所致离体肠管痉挛，但新斯的明对经黄瓜香孵育的离体肠管不能引起收缩亢进，提示黄瓜香对平滑肌上胆碱能受体的拮抗作用，可能不是单纯通过拟胆碱酯酶或直接影响胆碱酯酶的功能。阿托品为M-R受体阻断剂，黄瓜香与阿托品对小肠平滑肌有协同抑制作用，进一步说明黄瓜香对平滑肌的抑制作用不单纯是通过阻断M-R受体所致。
4．3 黄瓜香对平滑肌兴奋——收缩偶联的影响
Ca2+在介导平滑肌收缩反应中起核心作用，通过兴奋——收缩偶联过程而实现。氯化钡是通过促进细胞内Ca2+的释放而引起肠管平滑肌痉挛［10］。黄瓜香能对抗氯化钡所致肠管痉挛，提示其具有钙拮抗作用。但黄瓜香对抗氯化钡所致痉挛是否与其有关，有待进一步的研究。
4．4 黄瓜香对多巴胺受体协同作用
多巴胺激动肠平滑肌上D受体，抑制肠道平滑肌的运动，黄瓜香能协同多巴胺抑制肠道平滑肌的运动。但黄瓜香对经酚妥拉明孵育的离体肠管仍有显著的抑制，说明对肠管α受体的阻断作用不影响黄瓜香对肠管平滑肌的抑制作用，怀疑其抑制作用可能与激动α受体无关［11］。
综上所述，黄瓜香对于离体平滑肌的抑制作用机制可能与其抗M胆碱能受体、钙拮抗作用有关，但与激动肠肌多巴受体无明显关系。
参考文献
1 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志:第五十一卷［M］.北京:科学出版社，1991：100~101
2 魏云.蔓茎堇菜对外周血细胞数及骨髓细胞数的影响［J］.湖南医学，1994，5(11)：80~82
3 彭源贵.蔓茎堇菜升高白细胞的有效成分［J］.中草药，1991，22(9)：426
4 陈由强，林国宇等.蔓茎堇菜总黄酮含量的测定［J］.福建师范大学学报(自然科学版)，2000，4(16)：67~69
5 李先辉等，黄氧瓜香水提物体外抗化活性实验吉首大学学报(自然科学版)，2006，（5）：100~102
6 陈奇.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社，1996：332
7 杜鹃等.银杏叶提取物对小肠运动的实验研究浙江中医杂志2003年12月号537~538
8 张三印，杨鹏，等.胃肠运动障碍的发病机制和证治［J］.中医药学刊，2003，21（2）：209~211
9 官福兰，王汝俊，王建华.桔壳及辛弗林对兔离体小肠运动影响的研究［J］.中药药理与临床，2002，18(2)：9211
10 黄锦梅，等.黄连解毒汤对胃肠道影响的实验研究［J］.中药药理与临床，1994，(2)：829
11 戴媛媛，刘保林，窦昌贵.吴茱萸氯仿提取物对胃排空的影响［J］.中药药理与临床，2003，19(3)：16~19
(收稿日期：2007年6月20日)