【摘 要】
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目的 构建无标记的clpP基因缺陷的变异链球菌(简称变链菌)突变株.方法 设计引物PCR扩增大观霉素(Sp)抗性基因,使loxP位点位于Sp抗性基因的两侧,构建出大观霉素抗性基因盒(lox
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目的 构建无标记的clpP基因缺陷的变异链球菌(简称变链菌)突变株.方法 设计引物PCR扩增大观霉素(Sp)抗性基因,使loxP位点位于Sp抗性基因的两侧,构建出大观霉素抗性基因盒(loxP-Sp-loxP).将clpP基因克隆到pGEM-T-Easy TA载体后,双酶切以去除clpP基因的部分序列,并连入loxP-Sp-loxP,得到clpP基因缺陷的同源重组载体pIB△clpP-Sp.将该载体线性化并电转变链菌标准株,大观霉素筛选得到clpP基因缺陷株.再以温敏质粒pCrePA电转缺陷株,Cre重组酶表达并删除选择标记基因,继而在限制性温度下培养以消除pCrePA,获得无标记的clpP基因缺陷株,并进行PCR及DNA测序鉴定.结果 PCR及DNA测序结果表明clpP基因内部分序列已被删除,且无Sp抗性基因,该部位只留有一个34 bp的loxP位点.结论 在变链菌中成功构建出无标记的clpP基因缺陷株,为进一步研究clpP基因的功能及其在变链菌致龋过程中的作用奠定了基础.
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