【摘 要】
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基于核磁共振氢谱(1 H NMR)代谢组学结合分子对接技术筛选补肾壮骨汤促睾酮合成的活性成分.应用酶联免疫吸附分析(ELISA)法分析补肾壮骨汤及其膜分离组分对过氧化氢诱导的小
【机 构】
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长春中医药大学吉林省人参科学研究院;健康管理学院 ,长春130117
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基于核磁共振氢谱(1 H NMR)代谢组学结合分子对接技术筛选补肾壮骨汤促睾酮合成的活性成分.应用酶联免疫吸附分析(ELISA)法分析补肾壮骨汤及其膜分离组分对过氧化氢诱导的小鼠睾丸间质细胞(Mouse leydig cells,TM3细胞)上清液睾酮含量的影响,应用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(RRLC-Q-TOF-MS)技术快速分析其升睾活性组分中的化学成分组成.利用1 H NMR代谢组学技术揭示过氧化氢诱导TM3细胞在给予升睾活性组分后的差异代谢物,进而通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库分析差异代谢物的代谢靶点,并与睾酮合成相关靶点交集,得到升睾活性组分促睾酮合成的效应靶点.最后,确定能够影响效应靶点表达的关键蛋白,应用分子对接技术从活性组分中筛选出与此关键蛋白结合较好的化学成分.在补肾壮骨汤升睾活性组分中解析了27种化学成分的可能结构;细胞代谢组学分析共鉴定出牛磺酸、谷氨酸、乙酸等33种差异代谢物,得到促睾酮合成的效应靶点为睾丸激素17-β-脱氢酶(Testosterone 17-β-dehydrogenase,17β-HSD),KEGG分析表明,抑制关键蛋白 α 蛋白激酶1(α-kinase 1,ALPK1)磷酸化影响17β-HSD表达能够促进睾酮合成.分子对接结果表明,樱桃苷、原儿茶酸等14个化学成分与ALPK1结合较好,可作为补肾壮骨汤促睾酮合成潜在活性成分,为此复方的药效物质基础研究提供了参考.
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