【摘 要】
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尝试用冷冻干燥法来长期保存脐血和有核细胞,并对冻干效果进行比较分析。选用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、蔗糖和甘露醇等作为冻干保护剂,先将样品冻结到-38℃,随后在-30℃搁板温度
【机 构】
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上海理工大学低温生物医学与技术研究所; 中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所; 中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所 上海200093; 上海200093;
【基金项目】
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国家自然科学基金重点项目(50436030);上海市教委重点学科资助
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尝试用冷冻干燥法来长期保存脐血和有核细胞,并对冻干效果进行比较分析。选用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、蔗糖和甘露醇等作为冻干保护剂,先将样品冻结到-38℃,随后在-30℃搁板温度下进行升华干燥,最后在15℃搁板温度下进行解吸干燥。冻干后的样品用磷酸盐缓冲液复水,然后用血细胞计数板、流式细胞仪和扫描电镜进行检测。实验结果表明:在400 g/L PVP+200 g/L蔗糖+100 g/L甘露醇作为保护剂时细胞数目恢复率最高,为(75.0±4.1)%(P<0.01),PI染色鉴定测得单个核细胞拒染率在400 g/L PVP+200 g/L蔗糖+10%胎牛血清作为保护剂时最高,为(98.57±0.68)%(P<0.01),CD34+细胞回收率最高为35.59%。最终确定有核细胞的冻干效果比全血的要好,初步判定冷冻干燥法保存脐血是可行的。
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