【摘 要】
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目的 探讨微小RNA-199b-3p(miR-199b-3p)对肾癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响,并分析其调控机制.方法 应用RT-qPCR检测人正常肾小管上皮细胞株HK-2细胞、肾癌细胞株786-O中的miR-199b-3p.取肾癌细胞株786-O,分别转染孔质粒、miR-199b-3p mimics建立miR-NC组和miR-199b-3p mimics组,分别应用CCK-8增殖实验、克隆形成实验、细胞流式实验、Transwell实验观察各组细胞增殖、凋亡、侵袭能力.应用生物信息学方法分析miR-199
【机 构】
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保定市第二中心医院泌尿外科,河北保定072750;保定市第二中心医院肿瘤科;邯郸市中心医院泌尿外科;河北大学附属医院泌尿外科
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目的 探讨微小RNA-199b-3p(miR-199b-3p)对肾癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响,并分析其调控机制.方法 应用RT-qPCR检测人正常肾小管上皮细胞株HK-2细胞、肾癌细胞株786-O中的miR-199b-3p.取肾癌细胞株786-O,分别转染孔质粒、miR-199b-3p mimics建立miR-NC组和miR-199b-3p mimics组,分别应用CCK-8增殖实验、克隆形成实验、细胞流式实验、Transwell实验观察各组细胞增殖、凋亡、侵袭能力.应用生物信息学方法分析miR-199b-3p可能作用的靶基因.取肾癌细胞株786-O,分别转染孔质粒、miR-199b-3p mimics(10 nmol/L)、miR-199b-3p mimics(50 nmol/L)、成纤维细胞生长因子2(FGF2)-siRNA,建立miR-NC组、miR-199b-3p mimics 10 nmol/L组、miR-199b-3p mimics 50 nmol/L组、FGF2-siRNA组,应用Western blotting法检测FGF2及PI3K/AKT信号通路关键分子表达蛋白.结果 786-O细胞中miR-199b-3p表达低于HK-2细胞(P<0.05).CCK-8增殖实验、克隆形成实验验显示miR-199b-3p mimics组细胞增殖能力低于miR-NC组(P均<0.05).细胞流式实验显示,miR-199b-3p mimics组细胞凋亡率高于miR-NC组(P<0.05).Transwell实验结果显示,miR-199b-3p mimics组786-O细胞侵袭能力低于miR-NC组(P<0.05).TargetScan7.2软件在线预测显示FGF23′非编码区与miR-199b-3p具有结合位点.Western boltting法实验结果显示,miR-NC组、miR-199b-3p mimics 10 nmol/L组、miR-199b-3p mimics 50 nmol/L组FGF2蛋白表达分别为0.87±0.11、0.42±0.06、0.23±0.04,三组两两比较P均<0.05.miR-199b-3p mimics组、FGF2-siRNA组细胞中FGF2、p-AKT、p-ERK蛋白表达低于miR-NC组,AKT、ERK蛋白表达高于miR-NC组(P均<0.05).结论 miR-199b-3p在肾癌细胞中低表达,可以抑制肾癌细胞增殖、侵袭并促进其凋亡,其作用机制可能与miR-199b-3p负靶向调控FGF2、PI3K/AKT信号通路有关.
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