【摘 要】
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目的建立一种高通量的甲硫氨酸亚砜还原酶A(MsrA)活性筛选体系,为后续的定向进化改造等研究提供快速的活性检测方法。方法随机挑取含pmMsrA重组表达质粒的基因工程菌单克隆,
【机 构】
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遵义医科大学生物化学教研室,遵义医科大学细胞生物学教研室
【基金项目】
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遵义市科技局校联基金(遵市科合社字[2017]17号);国家自然科学基金项目(31460230)
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目的建立一种高通量的甲硫氨酸亚砜还原酶A(MsrA)活性筛选体系,为后续的定向进化改造等研究提供快速的活性检测方法。方法随机挑取含pmMsrA重组表达质粒的基因工程菌单克隆,在96孔培养板中培养并表达重组蛋白。利用溶菌酶破碎含MsrA重组蛋白的基因工程菌,利用DTNB-DTT显色法,测定样品反应液在412nm处的光吸收减少值,来衡量MsrA酶蛋白的相对活性。结果MsrA蛋白在96孔培养板中成功获得了具有生物学活性的重组表达,通过DTNB-DTT显色法活性测定,每个培养孔中表达的重组蛋白的生物学活性均几乎一
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