【摘 要】
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目的 探讨弓形虫感染人原代肺泡巨噬细胞的特点以及调节JAK1-STAT6信号通路对人肺泡巨噬细胞极化的影响. 方法 收集肺癌患者肺泡灌洗液,分离纯化肺泡巨噬细胞并作细胞爬片处
【机 构】
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宁夏医科大学临床医学院,宁夏银川,750000;宁夏临床病原微生物重点实验室;宁夏医科大学总院医学实验中心
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目的 探讨弓形虫感染人原代肺泡巨噬细胞的特点以及调节JAK1-STAT6信号通路对人肺泡巨噬细胞极化的影响. 方法 收集肺癌患者肺泡灌洗液,分离纯化肺泡巨噬细胞并作细胞爬片处理,体外选择1∶1的比例感染弓形虫并设置不同感染时间,Diff染色分析巨噬细胞内弓形虫的增殖情况.分别在不同感染时间收集细胞,提取全蛋白,Western blot检测信号通路蛋白的表达;Trizol法提取mRNA,反转录为cDNA后采用Real-time PCR检测相关mRNA的表达. 结果 成功分离并纯化得到肺泡巨噬细胞并感染弓形虫.Diff染色显示弓形虫可在肺泡巨噬细胞生存繁殖,从24 h开始弓形虫繁殖力较为明显增强,36h时弓形虫数量显著增多并且从细胞内释放到细胞外.Western blot检测M1型巨噬细胞信号通路蛋白STAT1、P-STAT1和P-NF-κB呈先增高后降低的趋势,以P-NF-κB先升高后增加的趋势尤为明显;M2型巨噬细胞信号通路JAK1、STAT6和P-STAT6信号通路蛋白也呈现逐渐升高的趋势,iNOS的表达呈显著降低的趋势,Arg-1的表达量在6h时较高(t=9.35,P＜0.05).Real-time PCR检测TNF mRNA相对表达量逐渐降低,iNOS mRNA相对表达量在6h时升高,之后降低;Arg-1 mRNA相对表达量的相对表达量逐渐升高,48 h时表达量升高尤为显著(t=4.27,P＜0.05). 结论 弓形虫感染能诱导巨噬细胞表达M2型细胞炎性因子,并抑制M1型细胞因子的表达,可通过JAK1-STAT6信号通路调节人原代肺泡巨噬细胞向M2型巨噬细胞偏移.
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