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目的:利用AdEasy腺病毒载体系统包装含人类免疫缺陷病毒1型(艾滋病毒:HIV-1)病毒体感染性因子(Vif)的重组腺病毒,使之感染原发性渗出性淋巴瘤细胞系BCBL-1细胞,并检测Vif蛋白对细胞中卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi′ssarcomaassociated herpesvirus,KSHV)潜伏感染与裂解性复制的影响。方法:从实验室先前构建的重组真核表达质粒pCI-neo-Vif中扩增出Vif基因,插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中构建成pAdTrack-Vif,酶切线性化的重组穿梭质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共同转化感受态BJ5183细胞构建成重组腺病毒质粒。重组腺病毒在AD293细胞中得到包装和扩增。用荧光计数法测定腺病毒滴度,以感染复数(MOI)为1的病毒量感染靶细胞BCBL-1,荧光显微镜观察靶细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达,并利用逆转录PCR(RT-PCR)和免疫印记(Western blot)技术分别检测Vif基因在靶细胞中的转录和表达情况,而且采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和Western blot分别检测KSHV裂解期基因ORF26 mRNA转录及裂解期蛋白vIL-6的表达。结果:经酶切鉴定、核酸序列测定、GFP表达和病毒上清液PCR证实成功包装了携带HIV-1 Vif基因的重组腺病毒,滴度为2.5×108 TU/ml。重组腺病毒感染BCBL-1细胞48 h后,80%以上的细胞中表达GFP,RT-PCR和Western blot均能够在相应位置检测到目的基因Vif的条带。Real-time PCR和Western blot结果显示,Vif降低KSHV ORF26 mRNA转录水平及vIL-6蛋白表达。结论:成功包装了含HIV-1 Vif基因的重组腺病毒且在BCBL-1细胞中表达的HIV-1 Vif蛋白能够抑制KSHV裂解性复制、增强病毒的潜伏感染。