【摘 要】
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目的:通过构建体外共培养体系,探讨神经干细胞(NSCs)对脂多糖(LPS)活化后的视网膜小胶质细胞(RMG)生物学功能的影响及TIMP1/MMP9途径在其中的可能作用.方法:采用振荡分离法获
【机 构】
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中国人民解放军南部战区总医院眼科 广东广州510010
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目的:通过构建体外共培养体系,探讨神经干细胞(NSCs)对脂多糖(LPS)活化后的视网膜小胶质细胞(RMG)生物学功能的影响及TIMP1/MMP9途径在其中的可能作用.方法:采用振荡分离法获取C57/BL6小鼠原代RMG,通过免疫荧光技术检测细胞Iba1的表达对其进行鉴定.采用含有LPS的培养基(终浓度为1μg·mL-1)刺激RMG 24h后,将其分为LPS对照组、NSCs组、TB-NSCs组,其中NSCs组将RMG与NSCs共培养24 h,TB-NSCs组将RMG与用中和性抗体封闭TIMP1的NSCs共培养24h;同时,未予以LPS刺激的RMG作为空白对照组.采用免疫荧光技术检测各组RMG的Ki67表达情况,观察其增殖能力;TUNEL技术检测各组RMG凋亡情况;ELISA方法检测各组RMG上清液中TNF-α、IL-1β的蛋白质量浓度.结果:采用振荡分离法获取的原代RMG经免疫荧光染色鉴定Iba1呈阳性.NSCs组Ki67阳性率较LPS对照组降低(P＜0.05),而TB-NSCs组Ki67阳性率较NSCs组升高(P＜0.05).NSCs组TUNEL阳性率较LPS对照组明显升高(P＜0.05),而TB-NSCs组TUNEL阳性率与NSCs组间差异无统计学意义(P＞0.05).空白对照组、LPS对照组、NSCs组、TB-NSCs组RMG上清液中TNF-α蛋白质量浓度分别为(2.10± 0.65)、(25.69±2.01)、(20.01±1.63)、(23.76±1.45)ng·mL-1,总体比较差异显著(FTNF-α=302.65,PTNF-α＜0.05);IL-1β蛋白质量浓度分别为(1.77± 0.74)、(15.38±1.18)、(10.88± 0.95)、(13.45± 1.41)ng·mL-1,总体比较差异非常显著(FⅡ,18=179.84,PIL-1β＜0.05);其中,NSCs组TNF-α及IL-1β蛋白质量浓度均较LPS对照组显著降低(P＜0.05),TB-NSCs组TNF-α及IL-1β蛋白质量浓度较NSCs组明显升高(P＜0.05).结论:体外共培养模式下,NSCs可抑制RMG增殖能力,提高其凋亡水平,并抑制其分泌促炎因子TNF-α及IL-1β,该效应可能与调控TIMP1/MMP9相关.
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