【摘 要】
：
目的:克隆人Runx3基因全长编码区的cDNA,进行鉴定和测序分析,并利用载体pQE30在大肠埃希菌(M15)原核表达人Runx3基因全长序列,为从转录水平探讨Runx3基因与免疫相关性疾病以
论文部分内容阅读
目的:克隆人Runx3基因全长编码区的cDNA,进行鉴定和测序分析,并利用载体pQE30在大肠埃希菌(M15)原核表达人Runx3基因全长序列,为从转录水平探讨Runx3基因与免疫相关性疾病以及肿瘤发生发展的关系奠定基础.方法:MACS分离外周CD8+T细胞;采用RT-PCR方法从人外周血CD8+T细胞获得Runx3基因的cDNA,并连接pMD19-T载体导入大肠埃希菌DH5α,选择阳性克隆,应用M13 F/R通用引物进行双向反应测序,以作序列鉴定.利用PCR技术从克隆载体pMD19-T/Runx3获得人Runx3的全长编码序列,亚克隆至原核表达载体pQE30,形成重组表达质粒pQE30/Runx3;酶切鉴定挑选阳性重组质粒转化大肠埃希菌M15,测序鉴定后经IPTG 30%诱导4 h,SDS-PAGE电泳判断以包涵体形式存在的带有His标签的融合蛋白并进行Western blot鉴定.结果:扩增获得的Runx3基因CDS区全长1 248 bp,编码415个氨基酸残基,与GenBank中发表的序列完全一致.成功构建了原核表达载体pQE30/Runx3,并在工程菌M15中获得大量表达.结论:获得了人Runx3基因的克隆,并成功原核表达和制备出人Runx3融合蛋白.
其他文献
骨形成蛋白2 (BMP2)对牙胚发育、形态发生及细胞外基质的分泌有重要的调控作用,并且能刺激间充质干细胞向成骨细胞、成软骨细胞及成牙本质细胞的分化.近年来国内外就BMP2在牙
在我国社会主义市场经济改革不断深入的今天，我国的民营企业迎来了自身发展的最佳时机啊，同时在发展过程中，所面临的各种问题，同样存在。可谓是机遇与挑战并存。民营企业在发展过
金融效率的高低决定着金融发挥作用的成本和作用力的强弱，直接影响着生产性资金流动的规模和方向，并在很大程度上决定着整个经济发展的效率。当前农村金融效率低下制约了中国金
本研究应用除草剂氟乐灵处理两叶一心幼苗生长点,进行同源四倍体萝卜种质诱导,对变异植株进行形态、细胞学鉴定和花粉母细胞染色体数目鉴定。结果表明,应用 0.2 mmol/L 和 1.
目的:观察骨形成蛋白(BMP-2)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和地塞米松(Dex)联合应用对犬牙周膜细胞(PDLCs)成骨分化能力的影响。方法:将第4代犬PDLCs分为5组:bFGF+Dex、BMP
以MC3T3-E1细胞系为实验材料,探讨了真核表达的重组蛋白rACCBP对成骨细胞的作用.结果表明:rACCBP对MC3T3-E1的分化具有抑制作用,用含有0.001 g/mL rACCBP的DMEM培养液,培养8d
目的:对恶性疟原虫pfs25的多拷贝基因重组菌株在毕赤酵母中进行表达分析,研究基因拷贝数对Pfs25蛋白表达量的影响。方法:构建重组质粒pAO815-αpfs25,利用BglⅡ-BamHⅠ同尾酶
[目的]确定甘肃棘豆中是否存在产生苦马豆素(SW)的内生真菌.[方法]对甘肃棘豆的内生真菌进行分离,应用薄层色谱法和气相色谱-甲基化-α-D-甘露糖苷内标法分别对菌丝中SW进行
电厂循环冷却水系统多数为敞开式系统,简述了再生水指标对循环水系统的影响,介绍了不同标准对再生水回用于敞开式循环冷却水系统各指标的规定,鉴于不同标准对再生水指标规定
骨髓间充质干细胞（BMSCs）是一种存在于人和动物骨髓等组织中，具备有多向分化潜能的成体干细胞体系。其具有取材简便、易于体外培养扩增、体内移植免疫排异反应少、可自体移植避