聚苯丙赖氨酸真核表达质粒的构建及其表达

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目的制备膜表达聚苯丙赖氨酸蛋白瘤苗并研究其抗肿瘤治疗作用。方法人工合成表达聚苯丙赖氨酸的DNA片断,扩增成带酶切位点的目的基因。选择载体pDisplay,将目的基因插入载体多克隆酶位点BgⅠ Ⅱ、PstⅠ之间。DNA测序证实后.以脂质体转染的方法转染到鼠CT26细胞。采用G418抗性筛选并扩增阳性克隆,化疗药处理后采用化学偶连两步法使跨膜型多聚苯丙赖氨酸与肠癌细胞膜共价偶连,构建成新型瘤苗,观察瘤苗体外免疫效应。结果酶切电泳和DNA测序证实载体构建正确,目的基因的上游带信号肽序列,下游带跨膜序列。RT—P
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