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目的建立反相高效液相色谱法测定妥布霉素滴眼液含量的方法。方法选用C18色谱柱，2，4-二硝基氟苯（DNFB）柱前衍生化，0.25％三羟甲氨基甲烷-乙腈-0．5mol·L^-1硫酸溶液（40：59：1）为流动相，检测波长为365nm。结果在10．56-15．84μg范围内峰面积与浓度呈良好线性关系，r=0．9996；平均回收率为99，90％。RSD为0．37％。结论该方法简便准确，重现性好，可用于妥布霉素滴眼液含量的测定。