探讨高乌甲素(LA)对重度烧伤大鼠疼痛和炎症反应的作用及其机制。
方法取40只SD大鼠按随机数字表法(下同)分为健康＋生理盐水组、假伤＋生理盐水组、单纯烧伤组、烧伤＋LA组、健康＋LA组，每组8只。单纯烧伤组、烧伤＋LA组大鼠背部及右后肢造成约32%TBSA深Ⅱ度烫伤(以下称烧伤)，假伤＋生理盐水组大鼠致假伤。烧伤＋LA组大鼠于伤前2.0 h及伤后即刻与伤后24.0、48.0、72.0 h分别腹腔注射1 g/L LA溶液4 mL/kg，健康＋LA组大鼠于同前各时相点腹腔注射相同剂量的LA溶液，健康＋生理盐水组、假伤＋生理盐水组大鼠于同前各时相点腹腔注射生理盐水4 mL/kg。于伤前1.5 h及伤后12.5、24.5、36.5、48.5、72.5 h，观察致伤大鼠疼痛行为并对大鼠行机械缩足反射阈值(PWMT)检测；未致伤2组大鼠于同前各时相点行相同观测。另取32只SD大鼠分为生理盐水组、三硝基苯基(TNP)－ATP组、米诺环素组、磷酸吡哆醛(PPADS)组，每组8只，均同前致烧伤。伤后48.0 h，生理盐水组大鼠鞘内注入10 μL生理盐水，TNP－ATP组大鼠鞘内注入30 nmol/μL TNP－ATP 10 μL，米诺环素组大鼠鞘内注入5 g/L米诺环素10 μL，PPADS组大鼠鞘内注入10 nmol/μL PPADS 10 μL。注射前后0.5 h，测量大鼠PWMT。伤后72.5 h，取假伤＋生理盐水组、单纯烧伤组、烧伤＋LA组大鼠脊髓背角组织行免疫荧光染色观察P2X4受体和OX42受体共表达情况，行免疫组织化学染色观察P2X4受体表达并计数阳性细胞；取大鼠静脉血采用ELISA法检测血清TNF－α、IL－1β含量。未致伤2组大鼠于同前时相点行相同观测。对数据行单因素方差分析、重复测量方差分析、SNK检验、配对t检验和Bonferroni校正。
结果(1)健康＋生理盐水组、假伤＋生理盐水组、健康＋LA组大鼠各时相点未出现活动异常现象。至伤后72.5 h，单纯烧伤组大鼠精神状态欠佳，可见背部及右后肢烧伤皮肤红肿、有水疱，出现步态不稳等现象，偶有舔咬、抓挠现象；烧伤＋LA组大鼠舔咬、跛行等行为较单纯烧伤组减少，创面红肿消退较单纯烧伤组快。(2)伤前1.5 h，健康＋生理盐水组、假伤＋生理盐水组、单纯烧伤组、烧伤＋LA组、健康＋LA组大鼠PWMT组间总体比较差异无统计学意义(F＝0.106，P>0.05)。单纯烧伤组大鼠伤后各时相点PWMT均明显低于其余4组(P值均小于0.05)，烧伤＋LA组大鼠伤后各时相点PWMT均明显低于健康＋生理盐水组、假伤＋生理盐水组和健康＋LA组(P值均小于0.05)。(3)注射前0.5 h，生理盐水组、TNP－ATP组、PPADS组、米诺环素组大鼠PWMT相近，分别为15.3±0.8、15.1±1.0、15.3±0.9、15.6±1.1(F＝0.343，P>0.05)。注射后0.5 h，生理盐水组和PPADS组大鼠PWMT分别为15.2±1.2和14.8±1.0，明显低于TNP－ATP组和米诺环素组的20.8±1.4和26.3±1.0(P值均小于0.05)。生理盐水组和PPADS组大鼠注射前后PWMT相近(t值分别为0.073和－0.772，P值均大于0.05)，TNP－ATP组和米诺环素组大鼠注射后PWMT较注射前升高(t值分别为－10.180和－20.813，P值均小于0.01)。(4)伤后72.5 h，健康＋生理盐水组、假伤＋生理盐水组、健康＋LA组大鼠少量小胶质细胞共表达P2X4受体和OX42受体，单纯烧伤组及烧伤＋LA组大鼠大量小胶质细胞出现P2X4受体和OX42受体共表达。伤后72.5 h，单纯烧伤组大鼠P2X4受体阳性细胞数较其余4组多(P值均小于0.05)，烧伤＋LA组大鼠P2X4受体阳性细胞数明显多于健康＋生理盐水组、假伤＋生理盐水组和健康＋LA组(P值均小于0.05)。(5)伤后72.5 h，单纯烧伤组大鼠血清TNF－α和IL－1β含量均明显高于其余4组(P值均小于0.001)，烧伤＋LA组大鼠血清TNF－α和IL－1β含量均明显低于健康＋生理盐水组、假伤＋生理盐水组和健康＋LA组(P值均小于0.001)。
结论LA对重度烧伤大鼠具有明显镇痛作用，可改善机体过度炎症状态。其作用机制可能与抑制脊髓背角小胶质细胞上P2X4受体表达，减少炎症因子TNF－α、IL－1β释放有关。