【摘 要】
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目的:为筛选出表达LacZ基因重组山羊痘病毒的适宜培养细胞系.方法:将常用于培养山羊痘病毒(GPV)的乳仓鼠肾细胞(BHK21)、羊肾细胞(SK)和羔羊睾丸细胞(LT)培养至单层,之后单层细胞用含X-gal的培养基继续培养,观察比较各细胞在X-gal环境中呈现的蓝色.提取单层细胞的RNA,进行LacZ基因的RT-PCR,回收PCR产物、连接载体、转化E.coli挑阳性克隆测序分析.将单层细胞继续培养72 h,检测各细胞产生的β-半乳糖苷酶.结果:随着培养时间的延长,固体培养的BHK21、LT细胞孔中胶颜色
【机 构】
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重庆市畜牧科学院 重庆402460;重庆市兽用生物制品工程技术研究中心 重庆402460;重庆酉阳土家族苗族自治县畜牧产业发展中心 重庆409812
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目的:为筛选出表达LacZ基因重组山羊痘病毒的适宜培养细胞系.方法:将常用于培养山羊痘病毒(GPV)的乳仓鼠肾细胞(BHK21)、羊肾细胞(SK)和羔羊睾丸细胞(LT)培养至单层,之后单层细胞用含X-gal的培养基继续培养,观察比较各细胞在X-gal环境中呈现的蓝色.提取单层细胞的RNA,进行LacZ基因的RT-PCR,回收PCR产物、连接载体、转化E.coli挑阳性克隆测序分析.将单层细胞继续培养72 h,检测各细胞产生的β-半乳糖苷酶.结果:随着培养时间的延长,固体培养的BHK21、LT细胞孔中胶颜色变蓝且逐渐加深,显微镜观察可见细胞蓝斑,而SK细胞、空白、无X-gal孔中的胶未变色,镜检无细胞蓝斑;液体培养的单层细胞逐渐脱壁,培养液未见蓝色.RT-PCR产物电泳条带与预期分子量大小相符,测序结果显示目标DNA与LacZ基因序列相似性值达100％,表明3种细胞均有LacZ基因的转录本.β-半乳糖苷酶测定结果显示3种细胞均表达此酶,细胞产酶能力比较为BHK21＞LT＞SK,尤以SK细胞产β-半乳糖苷酶量极低.结论:显色差异法筛选出的羊肾细胞适宜培养表达LacZ基因的重组山羊痘病毒,结果可为山羊痘病毒新型疫苗研发提供一些参考.
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