皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)胚胎RNA分离和cDNA文库构建

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从皱纹盘鲍胚胎样本中分离RNA并构建了cDNA文库。分别收集孵化8、10和12h的皱纹盘鲍胚胎,用抽滤除菌的海水反复悬浮胚胎,将这3个发育阶段的胚胎样本等量混合后用TRIZOL试剂提取总RNA,将提取物用酚-氯仿-异戊醇再抽提2次,分离获得高质量的总RNA。从总RNA中分离mRNA,构建了皱纹盘鲍混合胚胎的cDNA文库,未扩增胚胎文库的滴度为5.0×10^6pfu/ml,重组率为94.12%,插入片段均大干400bp,70.6%克隆的插入片段分布在1000—1500bp之间,扩增后的文库滴度为3
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